将测试虹膜肌肉神经支配用的药水滴入结膜囊，只在神经末梢与肌肉接连处发生作用。常用的试药有阿托品、后马托品、毒扁豆碱、毛果芸香碱、可卡因及肾上腺素等。
   
      阿托品阻止乙酰胆碱的作用，故有抑制副交感神经活动的作用。阿托品与细胞运动终板的亲和力比乙酰胆碱与运动终板的亲和力大，再者，它能抑制运动终板使肌细胞不能兴奋。故阿托品为有效的副交感神经解除剂，能抑制缩瞳肌的冲动而使瞳孔扩大。
   
      后马托品为苯乙醇酸与莨菪酸合成。但从作用上来说属于阿托品类，唯作用强度较弱及维持时间较短而已。
   
      毒扁豆碱为抑制胆碱酯酶的药物(其抑制作用为可逆性的，此与D．F．P．的情况不同，D．F．P．的抑制胆碱酯酶的作用是不可逆性的)，故间接纵恿乙酰胆碱发挥作用，属兴奋副交感神经的药物，促进缩瞳肌的兴奋，而表现缩瞳作用。   

      毛果芸香碱与Mecholyl一样能直接兴奋缩瞳肌的运动终板，也为兴奋副交感神经的药物，为乙酰胆碱的毒蕈碱样作用。睫状神经节被阻断后，毒扁豆碱英雄无用武之地，滴药后瞳孔不能缩小，而滴毛果芸香碱能迅速缩瞳。
   
      可卡因与胺基氧化酶对抗，能阻止胺基氧化酶破坏去甲肾上腺素，故间接地兴奋交感神经。有人认为可卡因之所以能兴奋交感神经是因可卡因能提高肌细胞对去甲肾上腺素的渗透力。4%可卡因滴眼几分钟后开始轻微扩瞳，45分钟后瞳孔扩大至最高峰，扩瞳能维持45小时。交感神经节后纤维麻痹者因去甲肾上腺素已无法生成，故而不能扩大瞳孔。
   
      肾上腺素直接(刺激a及β一肾上腺素受体)兴奋扩瞳肌的肌细胞，1:lOO溶液能强有力地扩瞳，1:1000溶液不能将正常眼的瞳孔扩大；当交感神经节后纤维发生阻断变性后，对肾上腺素的敏感性提高，纵然用1:1000溶液也能达到扩瞳目的。

      新福林，又名苯肾上腺素，主要刺激a一肾上腺素受体，并部分释放去甲肾上腺素，3～10％溶液有明显扩瞳作用。
   
      瞳孔异常不是扩大就是缩小，可能为痉挛性，也可能为麻痹性。(Coppez试验瞳孔的方法：滴三次1:1000新鲜肾上腺素液或4％可卡因入眼(常将二药混合同时并用)，每隔一刻钟测量瞳孔直径，共测四次，可获如下结果：   

      滴药后瞳孔比滴药前有轻微扩大，此为正常的生理性反应。   

      滴药后瞳孔扩得很大，这表明为副交感麻痹性扩瞳，因缩瞳肌已无张力对抗，故滴兴奋交感神经性的药物能使瞳孔扩得很大。当动眼神经的病变在睫状神经节上方时，如滴以阿托品，能使此类原本扩大的瞳孔更形扩大；若不用阿托品或在阿托品作用消失后滴入毒扁豆碱，则能将病态瞳孔回复原状。
   
      原来扩大的瞳孔在滴入可卡因后并无作用，则必为痉挛性扩瞳，因患眼扩瞳纤维业已处于极度兴奋状态，故用药兴奋交感神经时不再能使瞳孔更扩大。痉挛性扩瞳滴用阿托品，瞳孔极度扩大；若滴用毒扁豆碱能稍微缩小一些。   

      滴入可卡因后，原来缩小的瞳孔呈中等度扩大，此为正常的生理性反应。
   
      若可卡因对于缩小的瞳孔仅能轻度扩大或毫无作用，则此种缩小的瞳孔为麻痹性的或痉挛性的，二者可借阿托品或毒扁豆碱鉴别之。滴阿托品后轻度扩大的为麻痹性缩瞳，若呈极度扩大表示为痉挛性缩瞳，因阿托品能解除缩瞳肌的痉挛。滴毒扁豆碱也能协助区别瞳孔缩小系麻痹性抑或痉挛性。麻痹性缩瞳因扩瞳肌麻痹，无对抗之力，故用毒扁豆碱兴奋副交感神经能使瞳孔极度缩小；痉挛性缩瞳的缩瞳肌已处于痉挛状态，用毒扁豆碱再度兴奋，瞳孔不发生进一步改变。   

      轻度的不全麻痹与轻度的痉挛所造成的两侧瞳孔不等者，极难区分；若系完全麻痹或显著痉挛，则能用此法获知病变的性质——麻痹、痉挛、交感系统、副交感系统。但不能孤立地看药物试验，并应结合视力及瞳孔反应(直接及间接)，了解究竟为传入纤维(感觉性)抑或传出纤维(运动性)障碍所致之瞳孔扩大。若系运动性障碍才适合用此法判别。由药物反应可指示交感系统中有病的神经原。若瞳孔不能被可卡因扩大但用肾上腺素能极度扩大，则为周围的神经原发生病变；若为相反的结果，则为第一个神经原有病变。此外，第一个神经元有病变，于疼痛时瞳孔显著扩大。然而，当第二及第三神经元发生病变时，瞳孔仅为轻度扩大。Cords发现节后病变引起瞳孔扩大，节前病变不损害瞳孔反应。4％可卡因已足够使扩瞳肌运动终板上的交感素积聚至一定量而扩瞳。交感神经节后麻痹，交感素的产生障碍，因而可卡因不能扩瞳。  

      1:1000肾上腺素不能作用于正常瞳孔，交感神经切断后立即用肾上腺素仍不能引起扩瞳，必须等待一定时期，俟作用细胞变得敏感后才能异乎寻常地发生扩瞳作用。