2视网膜移植技术

    2.1组织细胞来源  可来源于胚胎视网膜或尸体视网膜，也可经体外细胞培养后再移植到RP患者。如在体外培养RPE细胞，然后移植到视网膜色素变性的部位[16]。移植物可为新鲜的视网膜组织细胞，也可为冷冻保存的组织。Optisol可用于保存胚胎视网膜组织用于移植[17]。研究表明[18]，冷冻保存的视网膜组织能够成功地被移植到鼠视网膜，并存活，发挥其功能。

    2.2移植类型

    2.2.1 RPE细胞移植  主要成分为游离状态的细胞移植和单层细胞片植入。游离细胞移植创伤较小，细胞能均匀分布，但不能维持正常极性。单层细胞移植是将培养的单层细胞片切成适当的几何图形使用，它能维持正常极性，但手术难度大，RPE细胞和感光细胞具有相互依存性，RPE细胞对脱落的外节盘发挥周期性的吞噬作用，防止其堆积，影响感光细胞的正常功能。RPE细胞还对感光细胞具有营养保护和支持作用[19,20]。实验研究发现[19]，视网膜色素上皮细胞移植可推迟和减少视网膜细胞随年龄增长而发生的凋亡。

    2.2.2感光细胞移植  主要是以游离细胞悬液，视网膜组织颗粒和感光细胞片形式植入。游离细胞悬液以酶消化法得到，但此法分离所得到的细胞悬液破坏了感光细胞层的正常组织结构和细胞极性。于是Gouras等[21]就将视网膜制成组织颗粒，进行移植研究，认为此法可减少对细胞结构和排列的破坏，有利于移植物的生长。感光细胞移植片是将供体视网膜完整的分离出，然后用激光或组织切削机取得单纯的光感受器细胞层，可直接按移植该片或经储存培养后进行移植[22]。

    2.2.3带有RPE细胞的神经视网膜移植  视网膜变性不仅损害感光细胞，RPE细胞也受到损害，晚期，内层神经视网膜受到损害。近来，一些实验开展了带有RPE细胞的神经视网膜技术，Ghosh等[7,23]作了在视紫质转基因猪的全层视网膜移植的动物实验。结果证明全层神经视网膜可以被移植到感光细胞变性的大动物宿主，移植过程相对安全，移植物至少4mo内生存良好，形成大量感光细胞，可很好保护内层视网膜，这在重建视网膜变性的光感细胞方面很重要。Radtke等[24]研究发现胚胎视网膜能够与RPE一起移植，至少存活6mo而没有明显排斥反应。Seiler等[10]研究发现带有RPE的移植物使细胞排列更整齐，易于形成血管及细胞外基质。

    2.3移植方法

    2.3.1外路移植法  外路法系指经巩膜，脉络膜将移植物植入视网膜下腔。此法定位准确，对视网膜无明显损害，可避免移植的RPE细胞进入玻璃体而引起增殖性玻璃体视网膜病变（PVR）。

    2.3.2内路移植法  经角膜或睫状体平坦部切口入路，再直视下确定移植部位并将微细吸管刺入视网膜神经上皮下，植入移植物。内路法较外路法精确可靠，但有引起PVF的可能。随着玻璃体视网膜手术技术的发展，内路法的并发症已明显降低。特别是术中增加了玻璃体切割技术，直视下更准确选择移植部位并植入移植物，进一步减少了术后并发症的产生。

    2.4移植术后的形态观察

    2.4.1移植物标记法  1995年，Seiler等[25]报道了用来区分供体和受体视网膜组织细胞的两种方法：BrdU标记法和转基因法，可很好的区分供，受体组织细胞。1997年，Diloreto等[26]报道了用荧光素作为供体视网膜组织的染色剂，是一种短期有效的染色剂，是无毒的，对细胞生存力和分化无明显影响，可画图表示移植物的分布区域，并可进行扫描拍片。2003年，Warncke等[27]提供了一种更好的标记方法：就是用Alu序列的ISH作为标记，这种方法与以往方法比较，其突出优点是能清楚的辨认移植细胞而不干扰细胞的新陈代谢和生物学行为，易于显影，甚至单个移植细胞也能被识别，并且它们的生活状态在短期或长期研究中均能观察到。用这种方法，我们可以保证供体细胞准确的注入视网膜下腔，结合免疫组化法，供体细胞也可与吞噬细胞区别开来，这些ISH方法的应用对于RPE移植后的研究具有重要价值。

    2.4.2形态学观察  标记的宿主细胞和供体细胞比较容易区分，可采用光学显微镜，电子显微镜等进行形态学观察，荧光标记法，还可进行荧光扫描拍片观察。显微镜观察结合成像技术可记录细胞的生存状态及形态学特点，观察供体视网膜细胞与宿主视网膜细胞的整合情况。

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