【摘要】 目的 观察532nm倍频激光击射兔眼诱发脉络膜新生血管膜(choroidal neovascularization，CNV)发生情况。 方法 采用532nm倍频激光击射有色家兔眼底，照射参数为:1000mW、50μm、0.1s;激光击射后1个月将家兔处死，行组织学检查，观察激光击射兔眼眼底组织学变化和CNV形成情况。 结果 532nm倍频激光击射后，光镜下视锥、视杆细胞核下毛细血管丛状增生，血管周围有小灶出血，视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium，RPE)细胞萎缩断裂，脉络膜血管扩张充血。有的病灶处视网膜神经上皮变性、坏死，部分脱落或消失，被增生的胶质细胞所取代，形成胶质瘢痕，伴有视网膜色素上皮细胞灶性增生。 结论 激光小光斑、曝光时间短、能量过大击射有色家兔眼底，可引起玻璃膜破裂，诱发脉络膜新生血管。
关键词 激光 脉络膜新生血管 疾病模型 动物
Histological study of rabbit eye's choroidal neovascularization induced by laser
Zhang Hua，Wang Hongxia，Du Hongcai，et al.
Department of Ophthalmology Laboratory，Jinan Second People's Hospital，Jinan250001.
【Abstract】 Objective To observe the choroidal neovascularization of rabbit's eye stroked by532nm double fre-quency laser.Methods The fundus of rabbit eyes were stroked by532nm double frequency laser，the parameter of the laser was:1000mW，50μm and0.1s.Histolgical examination was used to observe the choroidal neovascularization1month later.Results After stroken of532nm double frequency laser，the capillary under the cone cell and rod cell proliferated in plexiform.There were small spot of hemorrhage，atrophy and breaking of retinal pigment epithelium cell and expansion and congestion of choroidal vessels.Some retinal nerve epithelium degenerated，necrosised and dropped or disappeared.It was displaced by gliacyte and came into being the scar and the hyperplasia of retinal pigment epithelium cell at the same time.Conclusion The stroken on the fundus of rabbit by small spot，short time exposure and macro-power laser could break up the Bruch's membrane and induce the choroidal neovascularization.
Key words laser choroidal neovascularization disease model animal
脉络膜新生血管膜(CNV)是由多种病因所致的脉络膜新生血管芽穿过Bruch膜，在视网膜色素上皮下和(或)上皮上增殖形成的纤维血管组织。CNV常引起视网膜下浆液性渗出、出血、晚期瘢痕形成，是造成视力丧失的主要原因。目前CNV的确切的病因和发生机制尚不清楚。本研究是利用激光击射兔眼眼底诱发脉络膜新生血管，建立兔眼CNV实验模型，观察其组织学变化，为进一步探讨CNV发生机制和治疗方法奠定基础。
1 材料与方法
1.1 实验动物 健康青紫蓝兔6只(12眼)，体重2～2.5kg，平均2.25kg，雌雄不限，由山东省农科院畜牧兽医研究所提供。
1.2 CNV动物模型的制作 激光击射前1h，用复方托品酰胺眼液散瞳3次。肌注盐酸氯胺酮(50mg/kg)和氯丙嗪(15mg/kg)麻醉后，0.5%丁卡因角膜表面麻醉，放置广角眼底接触镜(美国Ocular Instru-ments)，用532nm倍频激光机(澳大利亚Laserex)，在视盘下方1～2DD击射，5～20点。激光击射参数:1000mW、50μm、0.1s;激光反应斑以见到有气泡出现或少量出血，提示Bruch膜被击穿为准，并行激光击射后，光凝后7d、14d、21d行眼底彩色照像。
1.3 病理学标本制作 于激光击射后1个月，用空气栓塞法处死。摘除眼球在室温下固定于10%的缓冲福尔马林液中，石蜡包埋。在激光击射处连续切片，厚度4μm，HE染色。
2 结果
2.1 CNV模型眼底彩色照像 可见视盘下方出现灰白色病灶，有的病灶周围伴有出血。14d后有的病灶出现色素增生。
2.2 组织学检查结果 光镜下激光光凝处可见视网膜内丛状层萎缩变薄，内、外核层细胞数目减少，排列紊乱，视锥、视杆细胞核下毛细血管丛状增生，血管周围有小灶出血，RPE细胞萎缩断裂，脉络膜血管扩张充血(见图1)。有的病灶处视网膜上皮空泡变性、细胞数目减少，排列紊乱，深层胶质纤维增生并与脉络膜广泛粘连，视网膜色素上皮(RPE)断裂，Bruch膜消失，脉络膜毛细血管增生，色素细胞增多。有的病灶处视网膜神经上皮变性、坏死，部分脱落或消失，被增生的胶质细胞所取代，形成胶质瘢痕，伴有RPE细胞灶性增生(见图2、图3)。
3 讨论
CNV发生的确切机制尚不清楚，CNV来自脉络膜毛细血管，经Bruch膜入侵RPE下，Bruch膜的损害是产生CNV的先决条件 [1] 。正常视网膜色素上皮形成视网膜的外屏障，Bruch膜成为分隔脉络膜和视网膜的屏障、局部组织新生血管刺激因子和抑制因子处于动态平衡状态。当视网膜脉络膜缺氧、视网膜色素上皮受损、炎症、玻璃膜疣或Bruch膜受损发生后，这种动态平衡状态被打破，局部组织新生血管刺激因子占主导地位，新生血管膜形成。Heriot [2] 等用照相闪光灯照射大鼠产生光损伤的动物模型，发现在RPE光损伤区内的脉络膜毛细血管发生内皮细胞芽，消化其邻近的基底膜，显示了新生血管形成的最初步骤，脉络膜毛细血管内皮细胞芽发出伪足，穿过Bruch膜进入RPE下。继之，RPE光损伤区内出现新生血管。新生血管在损伤区时，其内皮细胞释放出吸引RPE细胞的物质，使邻近健康的RPE移行覆盖入侵的新生血管，一旦新生血管被RPE细胞包围，即停止渗漏和发展。这说明RPE细胞对血管内皮的增殖作用的一方面，而血管内皮细胞又有调整RPE细胞行为的另一方面，形成了临床上多种病情的发展和转归。本项研究中发现激光击射处7d、14d有CNV出现，21d后部分光凝点周围出现色素增生。激光光凝可破坏赖以产生的新生血管因子的缺血部视网膜，促使新生血管消退;但是激光小光斑、曝光时间短、能量过大时常引起Bruch膜破裂，诱发脉络膜新生血管 [3] 。本项研究利用532nm倍频激光，小光斑(50μm)、曝光时间短(0.1s)、大能量(1000mW)击射有色家兔眼底，诱发CNV的发生。组织学检查结果为:光镜下激光光凝处可见视锥、视杆细胞核下毛细血管丛状增生，血管周围有小灶出血，RPE细胞萎缩断裂，脉络膜血管扩张充血，有的病灶处视网膜上皮空泡变性、细胞数目减少，排列紊乱，深层胶质纤维增生并与脉络膜广泛粘连，RPE断裂、Bruch膜消失，脉络膜毛细血管增生，色素细胞增多。有的病灶处视网膜神经上皮变性、坏死，部分脱落或消失，被增生的胶质细胞所取代，形成胶质瘢痕，伴有RPE细胞灶性增生。(本文图片见附页2)
参考文献
1 聂爱光.现代黄斑疾病诊断治疗学.北京:北京医科大学、中国协和医科大学联合出版社，1997，121.
2 Heriot Wj，Henkind FP，Bellhorn RW，et al.Choroidal neovascularization can digest Bruch's membrane，a prior break is not essential.Ophthalmol-ogy，1984，91:1603.
3 卢信义.激光眼科学.北京:人民卫生出版社，1980，81-92. |
