2   结果

　　21   牛磺酸对光照后大鼠视网膜光感受器细胞凋亡的影响   对照组光照6h后，发现棕褐色TUNEL阳性细胞散在分布于外核层(ONL)内部，即受损的多为视杆细胞，而牛磺酸组光照9h后才开始出现阳性细胞，随光照时间延长，阳性感光细胞增多，光照24h后视网膜内核层、节细胞层也出现大量阳性细胞(图1)。光化学损伤后AI随光照时间延长逐渐增高，牛磺酸组光照12h AI值(123±47)％显著低于对照组(324±62)％，其他时相点也显著低于对照组(P<005)。

　　A：对照组，光照0h；B：对照组，光照9h；C：牛磺酸组，光照9h

　　图1   牛磺酸对光化学损伤后大鼠视网膜光感受器凋亡的影响(TUNEL，×400)（略）

　　22   牛磺酸对光照后大鼠视网膜cfos转录以及表达的影响

　　221   牛磺酸对光照后大鼠视网膜cfos mRNA表达的影响   光照后对照组和牛磺酸组大鼠视网膜cfos mRNA表达均出现一过性增高，且在光照1h达到峰值，随着光照时间延长其表达逐渐降低，于6h光照后其表达量接近未光照水平(图2)。利用灰度扫描计算V值发现，光照1h时牛磺酸组大鼠视网膜cfos mRNA较对照组表达低(P<005)。

　　222   牛磺酸对光照后大鼠视网膜cfos蛋白表达的影响   光照后2组动物视网膜cfos蛋白表达逐渐增高，于光照3h达到峰值，随光照时间延长其表达量逐渐降低，光照12h其表达量接近未光照时水平(图3)。A分析提示牛磺酸组3h蛋白表达相对量比对照组低(P<005)。

　　D：对照组；T：牛磺酸组

　　图2   不同光照时间对大鼠视网膜cfos mRNA表达的影响（略）

　　D：对照组；T：牛磺酸组

　　图3   不同光照时间对大鼠视网膜中cfos蛋白表达的影响（略）

　　3   讨论

　　视网膜光化学损伤后光感受器细胞丢失的机制尚存在一定的争议，但大部分研究者认为，凋亡是光化学损伤以及其他视网膜变性疾病光感受器细胞丢失的主要机制〔3，5〕。本研究在前阶段证实，4%牛磺酸能有效保护持续高强度光照〔(3000±20)lx，24h〕条件下大鼠视网膜基础上，结合凋亡细胞生化特征，采用TUNEL法检测凋亡细胞。实验结果提示，牛磺酸减少了光照不同时相点凋亡指数，与其他研究报道〔6，7〕牛磺酸具有抗神经元凋亡作用相符。近年研究发现，AP1是调控光感受器细胞凋亡的重要影响因子，其亚基cfos是必需的调控因子〔3，8〕。AP1参与了许多生理过程如细胞增殖、分化、死亡及恶性转化等，脂多糖、氧化应激、紫外线等均能增加其活性，并通过调节靶基因转录发挥作用〔7〕，其中，cjun／cfos二聚体形式的AP1复合物生物活性最强〔6〕。光损伤条件下cfos(-／-)大鼠光感受器细胞几乎未丢失，以及大鼠、小鼠和661W光感受器细胞短期光照后cfos mRNA表达一过性增高，均说明cfos在光诱导光感受器细胞凋亡中促进凋亡作用〔3，8〕。本研究发现,牛磺酸组cfos mRNA以及蛋白表达峰值均比对照组低，推测牛磺酸可能通过抑制cfos表达，导致整个AP1复合物减少，阻断凋亡信号转导，从而有效保护光感受器细胞。文献报道，TauCl能降低FLS细胞AP1活性，而牛磺酸不能〔9〕。因此，牛磺酸可能通过捕捉次氯酸(HOCI)形成TauC1，TauCl才是牛磺酸的活性形式，上述推论还需进一步证实。

　　参考文献

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　　〔2〕   张剑利，苏小枚，毕力夫，等.牛磺酸对小鼠视网膜光损伤保护作用的实验研究［J］.山西医科大学学报，2002，34(2)：113-115.

　　〔3〕   Wenzel A,Grimm C,Marti A,et al.cfos controls the “Private Pathway”of light-induced apoptosis of retinal photoreceptors［J］.Neurosci,2000,20(1):81-88.

　　〔4〕   Ildikó Káldi,Martin R E,Huang H,et al.Bright cyclic rearing protects albino mouse retina against acute light-induced apoptosis［J］.Molecular Vision,2003,9:337-334.

　　〔5〕   Hafezi F,Marti A,Grimm C,et al.Differential DNA binding activities of the transcription factors AP-1 and Oct-1 during light-induced apoptosis of photoreceptors［J］.Vis Res,1999,39(15):2511-2518.

　　〔6〕   周咏东，严密，张军军，等.可见光对培养的人视网膜色素上皮细胞凋亡的影响［J］.中华眼底病杂志，2002，18(3)：227-230.

　　〔7〕   Fleischmann A,Hafezi F,Elliott C,et al.Fra-1 replaces c-Fos-dependent functions in mice［J］.Genes Dev,2000,14(21):2695-2700.

　　〔8〕   Hafezi F,Steinbach J P,Marti A,et al.The absence of cfos prevents light-induced apoptotic cell death of photoreceptors in retinal degeneration in vivo［J］.Nat Med,1997,3(3):346-349.

　　〔9〕   Kontny E,Szczepanska K,Kowalczewski J,et al.The mechanism of taurine chloramine inhibition of cytokin (interleukin-6,interleukin-8) production by rheumatoid arthritis fibroblat-like synoviocytes［J］.Arthritis Rheum,2000,43(10):2169-2177.

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