摘要 目的 应用SYBR Green I荧光定量PCR法检测外伤性视神经损伤后P53、bax和caspase 3基因mRNA表达
的变化。方法应用液压颅脑损伤仪建立大鼠外伤性视神经损伤动物模型，伤后1、3、5、7、9、14、28 d处死，以Trizol法提取新鲜视网膜组织的总RNA，以Oligo(dt)18为引物逆转录合成cDNA并进行扩增，以T／A克隆法将纯化的目的片断与T／A克隆载体(pTZ57R／T)连接成重组质粒并转化入E．coli DH5 0I。采用碱裂解法提取重组质粒，经蓝白斑筛选、酶切、测序鉴定后，根据标准品建立标准曲线，由软件自动计算出待测样本中靶基因mRNA的含量，并以靶基因和内参GAPDH mRNA含量的比值作为评价靶基因表达水平的指标。 结果 由pTZ57R／T与目的基因所构建的标准曲线的线性关系良好、灵敏度高、特异性强、准确可靠。P53和bax均在视神经损伤后3 d mRNA表达明显增加，5 d时达到高峰，7 d后开始下降；伤后5 d easpase 3 mRNA表达明显增加，9 d时达到高峰，14 d后开始下降。三者表达水平与对照组相比，差异均有统计学意义(P<0．05)。 结论 促凋亡基因P53、bax和caspase 3在视神经损伤后视网膜神经节细胞(RGCs)的凋亡发生中起到重要作用。

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