2 EPO及EPO-R在视网膜中的分布

    EPO和EPO-R在胚胎和成年组织中广泛表达，在视网膜的研究中, Bocker-Meffert等[1]通过免疫染色发现EPO-R主要定位于视神经节细胞层，低密度的染色标记存在于内丛状层和外丛状层以及锥体内节部分。用含有特异性阻滞肽的抗EPO-R抗体进行免疫反应也证实了EPO-R在视网膜中的存在，同时Junk等[12]通过使用特异性的多克隆抗体发现EPO and EPO-R表达在正常的视网膜上，免疫组织化学研究定位在视网膜内层，免疫组织化学双标记染色示EPO-R的表达定位在视网膜神经节细胞、无长突细胞和Müller细胞。

    3视网膜缺血缺氧时EPO的产生机制

    视网膜在正常供氧情况下，低氧诱导因子HIF-1a（hypoxia inducible factor）是HIF的调节亚单位，快速被蛋白酶体很快降解，而视网膜缺血意味着视网膜组织同时缺氧和葡萄糖，此时，首先缺氧的局部组织产生一种转录因子—缺氧诱导因子HIF-1a，HIF-1a稳定，HIF-1a进入细胞核内，进入细胞核与HIF-1b形成异源二聚体，结合到目标基因染色体上缺氧反应元件（hypoxia response element，HRE）结合，启动包括EPO基因在内的一系列基因的转录，如EPO，VEGF，FGF2等，随着EPO的产生增加，EPO-R的表达也明显上调，EPO的信使mRNA被转运到细胞质并且翻译表达EPO蛋白[3]。

    4血视网膜屏障对EPO的影响

    Grimm等[4]研究EPO对视网膜光化学损伤的保护性研究中，通过实验组小鼠腹腔注射rHEPO 5 000U/kg后通过ELISA分析视网膜rhEPO的水平，注射后2h，100pg视网膜蛋白中EPO的含量可达到（0.74±0.24）mU；4h达到高峰（1.68±0.37）mU，8h降低4倍（0.47±0.13）mU。而对照组小鼠注射生理盐水后，视网膜中未检测到EPO，结果表明rHEPO腹腔注射后可通过小鼠血视网膜屏障进入视网膜组织同时，Brines等[5]报道中枢神经系统毛细血管内皮细胞表面存在大量EPO受体，血液中的EPO与毛细血管内皮细胞表面的EPO受体结合，可启动细胞内吞噬作用，将EPO通过血脑屏障转运至脑组织，由此推测小鼠血液中的rHEPO可能也是通过这一途径被转运至视网膜组织。

    5 EPO在视网膜损伤的保护现象

    Grimm等[6]利用视网膜光化学损伤的动物模型研究发现，（HIF-1a）促进了EPO的表达，从而对视网膜光化学损伤起保护作用。显示经过低水平氧（60mL/LO2）处理的鼠可防止光诱导的细胞凋亡从而保护视网膜感光细胞结构和功能。与视网膜光化学损伤细胞凋亡相关的细胞因子activator protein-1（AP-1）在低氧处理后没有抑制，缺氧预处理阻止了凋亡晚期的信号级联反应的caspase-1表达，同时低氧上调EPO的表达，EPO蛋白与其存视网膜感光细胞内段的相应受体结合，触发了信号的级联反应，从而抑制感光细胞的凋亡，并且免疫组织化学检查也证实视网膜感光细胞内段有EPO受体，这与EPO在感光细胞有直接的神经保护作用是相一致的。除了内源性EPO具有保护作用，rHuEPO也具有保护视网膜感光细胞免遭光损伤的作用。

    EPO对视网膜神经节细胞也具有神经保护作用。Junk等[7]发现在急性视网膜缺血再灌注损伤动物模型中缺血上调了视网膜EPORmRNA的表达，缺血后l2h开始上升，72h达到高峰，是正常的4倍，而EPO的表达呈下降趋势，48h后下降52%。在缺血前24h预治疗或缺血时立即腹腔注射rHuEPO有助于视网膜功能的恢复，并发现TUNEL（原位末端标记物法）阳性细胞减少，而缺血后用rHuEPO无效，提示EPO通过抗凋亡机制对急性视网膜缺血再灌注损伤具有神经保护作用，外源性全身应用EPO可以挽救损伤的神经元。同时，在缺血再灌注模型中，通过使用可溶性的EPO受体，通过对鼠的ERGb的检测，与对照组相比较，使用可溶性的EPO受体组的b波明显减少，提示加重了视网膜的缺血损伤效应。

    EPO与视网膜神经节细胞的轴突生长有关，它能够促进视网膜神经节细胞轴突的生长。Bocker-Meffert等[8]在生后鼠视网膜组织培养时分别加入EPO，血管内皮细胞生长因子（VEGF）呈剂量依赖性促进视网膜神经节细胞轴突的生长，当EPOR抗体加入培养基以阻断EPO的作用时其促轴突生长作用被抑制；提示EPO不仅有神经保护作用，而且在缺血视网膜中有促神经再生的功能。

    EPO还对视神经损伤后的视网膜神经节细胞的退行性改变有促进其恢复的作用，Alexandra Kretz等[9]研究发现使用转基因大鼠tg21，它能在神经细胞里优先表达人类EPO，在体外实验中，对视神经损伤后视网膜细胞培养，在培养液中加入EPO刺激神经节细胞的再生， 与未使用EPO的对照组相比，应用10到1 000U rhEPO时，能使总的轴突增加到8.31倍,从10～1 000U的浓度不同时它刺激RGCs轴突生长外展长度和数目都成比例,其结果提示EPO能促进RGC的再生并呈剂量依赖性。同时,分别对视神经轴突损伤后大鼠在0，3，6，9d给予玻璃体腔内重复注射EPO后对其进行视网膜细胞培养,结果也发现EPO能促进神经节细胞的再生轴突长度5.7倍和数目2.16倍。提示EPO可以刺激神经节细胞轴突再生,发挥着神经营养的作用。Weishaupt等[10]建立了轴突损伤模型, 在体外通过应用EPO阻止了缺乏神经营养因子小鼠的RGCs死亡，在体内阻止了GCs的轴突损伤，EPO神经保护效应与剂量呈钟型的剂量反应关系，进一步证明EPO对横断轴突后慢性中枢神经元凋亡有保护作用。最近也有报道，全身给予EPO治疗光损伤性视网膜变性或遗传性视网膜色素变性，发现对视网膜感光细胞有明显的保护作用。

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