0引言
视网膜新生血管发生的重要特征就是血管内皮细胞的分裂增生。近年来的研究结果显示,视网膜新生血管的发生发展与血管内皮生长因子(VEGF)的调控密切相关。现已明确细胞因子是通过活化靶细胞膜表面特定的受体,启动不同的信号传导通路而发挥其生物学效应的。然而,视网膜新生血管的形成是一个十分复杂的病理生理过程,其不仅表现为血管内皮细胞的分裂增生,同时还会伴有周细胞及基底膜等的一系列改变,因此,细胞因子不应被看作是视网膜新生血管发生的唯一因素。VEGF本身是一个多功能的细胞因子,它可激活血管增生的主要过程,包括血管内皮细胞的分裂、游走、血管通透性的增加以及某些相关酶活性的增加。这些活动均贯穿了新生血管形成的全过程,而组织纤溶酶原激活物(t-PA)及纤溶酶原激活物抑制剂(PAI)在新生血管生成的过程中具有重要的作用。我们探讨在PDR中t-PA及PAI的表达以及与VEGF表达的相关性。
1材料和方法
1.1材料 VEGF酶联免疫试剂盒 (Sigma公司),t-PA酶联免疫试剂盒(瑞典),PAI酶联免疫试剂盒(瑞典),Metretech 960型酶标仪(450nm) (美国)。所有实验组患者均为2型糖尿病伴有PDR。男14例,女21例,共35例35眼。平均年龄为63.3±10.6岁。对照组玻璃体标本取自特发性黄斑裂孔手术患者共20例20眼。男6例,女14例。平均年龄61.4±8.7岁。所有实验组及对照组玻璃体标本均取自玻璃体手术中。常规行经睫状体扁平部的三孔闭合式玻璃体切除术,在关闭灌注的情况下以玻切头进入眼内至玻璃体腔中央,切割并吸引玻璃体约0.3mL,取出玻切头,以注射器将切割之玻璃体反推入无菌的0.5mL Eppendorff离心管。-20℃冰箱保存备用。
1.2方法 将玻璃体标本离心后,取上清液进行检测分析。采用酶联免疫吸附法(ELISA法)测定实验组及对照组玻璃体标本中VEGF、t-PA和PAI的浓度。结果判定为每个标准品和标本的A值应减去零孔的A值,绘制标准曲线,以标准品浓度为横坐标,A值为纵坐标,连接各标准品坐标点。通过玻璃体及房水标本的A值可在标准品曲线上查出其相应浓度。
统计学处理:采用样本均数±标准差( )及两样本均数的t检验及一元相关和回归分析。
2结果
2.1玻璃体中VEGF、t-PA和PAI的表达 PDR眼玻璃体中VEGF、t-PA和PAI的浓度。t-PA对照眼玻璃体标本中有2例未检出。表明PDR眼内,t-PA和PAI均有显著的表达。
2.2 VEGF表达与t-PA及PAI表达的相关性 t-PA的表达与VEGF的表达显著相关(x:VEGF浓度,y: t-PA浓度),P <0.001。PAI的表达与VEGF的表达显著相关(x:VEGF浓度,y: PAI浓度),P <0.001。
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