评价贝伐单抗的抗增殖和细胞毒性作用,贝伐单抗是一种针对VEGF、人视网膜色素上皮(ARPE19)、鼠视网膜神经节细胞(RGC5)以及猪脉络膜内皮细胞(CEC)的单克隆抗体。 使用单层细胞培养的ARPE19、RGC5和CEC,将贝伐单抗(0.008mg/ml-2.5mg/ml)稀释到培养基里,加到细胞培养皿上培养细胞。采用溴苷掺合入细胞DNA中检测细胞增殖活性,以及应用显微镜进行形态学评价。细胞毒性检测发现ARPE19、RGC5和CEC细胞呈集合生长,然后在去除血清的培养基中培养,以确保细胞处于一种静止的环境中。1天后行MTT检测,检测活细胞/死细胞及TM期细胞活性/细胞毒性,应用荧光显微镜分析培育6,12,18,24,30,36和48小时后细胞形态。免疫组化分析VEGF、VEGF受体和血管假性血友病因子的表达。 1天后观察发现贝伐单抗对ARPE19、RGC5和CEC无毒性,然而2天后在2.5mg/ml贝伐单抗时ARPE19的细胞数量和细胞活性中度降低。贝伐单抗对CEC细胞的DNA合成存在剂量依赖关系,导致其中等程度的抗增殖活性(最大降低36.8%)。使用0.8mg/ml或更低的贝伐单抗对ARPE19和RGC5细胞没有抗增殖作用。ARPE19细胞上VEGF、VEGFR1和VEGFR2呈阳性表达。大于95%的CEC细胞上血管假性血友病因子呈阳性表达。 我们实验研究发现玻璃体腔应用0.25mg/ml的贝伐单抗是安全的。使用0.025mg/ml贝伐单抗对CEC细胞有中等程度的生长抑制作用,然而高剂量的贝伐单抗(2.5mg/ml)对视网膜色素上皮是有害的。