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3 讨论
角膜保存是角膜移植复明 手术能否推广应用的关键。多年以来人们一直在探寻延长角膜保存时间的方法，细胞凋亡的概念为角膜保存研究提供了另外一种思路。
细胞凋亡是有核细胞发生的细胞主动死亡［1］，与坏死在形态和生化特征上有着本质的区别。电子显微镜是定性检测细胞凋亡的可靠手段之一，TUNEL原位标记技术因其敏感性高、特异性强、能对凋亡细胞进行定量检测［2，3］ ，因而被广泛应用。
3．1 角膜中期保存过程中的细胞凋亡
我们应用光镜、电镜及TUNEL原位标记证实，兔角膜中期保存过程中角膜上皮、基质及内皮细胞均有典型的细胞凋亡发生，并且在一定时间内，随着保存时间的延长，细胞凋亡发生率也明显增加。表明细胞凋亡是角膜中期保存过程中细胞丧失的另外一种可能机制。细胞凋亡的发生也很显然对角膜中期保存效果存在一定的影响。
公认Optisol保存液在角 膜保存效果方面明显优于M-K液。我们应用TUNEL原位标记技术发现，用Optisol液保存的兔角膜，在保存3～7天内，与M-K液保存相同时间的角膜比较，其细胞凋亡发生明显减少，由此，更进一步证实细胞凋亡的发生影响了角膜中期保存的效果。
表皮生 长因子，已被证实在体外条件下能促进人及多种动物的角膜上皮、基质及内皮细胞的分裂、增殖与移行。Lindstrom等［4］将表皮生长因子加入角膜中期保存液中保存角膜，然后施行穿透性角膜移植术，术后发现角膜内皮细胞密度增加了7%。但是，Lass等［5］通过一个多中心参与的联合研究，否定了Lindstrom的观点。那么，表皮生长因子对于角膜中期保存过程中的细胞凋亡有无抵抗作用呢我们参照Lind strom和Lass的剂量，在M-K液中加入10ng／ml的表皮生长因子，结果发现，加入表皮生长因子的M-K液保存3、5、7天的角膜，其细胞凋亡发生与单纯M- K液保存角膜没有差别。表明表皮生长因子在角膜中期保存过程中没有阻止角膜细胞凋亡发生的作用。其可能原因，我们同意Lass的观点，即表皮生长因子在低温下活性降低或不能发挥作用。
3．2 角膜中期保存过程中细胞凋亡发现的临床意义
为了给临床应用提供更直接的依据，我们将M-K液保存的人角膜进行了检测。结果发现，在人角膜中期保存过程中，角膜上皮、基质及内皮细胞同样有细胞凋亡发生。Wilson等［6，7］的研究表明，IL-1、Fas、ICE等细胞因子或基因参与了角膜细胞凋亡的调控。这些有意义的结果提示我们可以从细胞凋亡调控角度来探讨阻止角膜中期保存过程中角膜细胞凋亡的方法，以达到提高角膜保存效果的目的。
本课题受广州市科委重点科技攻关项目资助(项目编号：98Z03101)
1，Smith CA，Williams GT，Kingsto n R，et al．Apoptosis．Nature，1989，338∶10
2，钟兴武，龚向明．细胞凋亡与角膜．国外医学·眼科学分册，1997 ， (6)∶335
3，Osborne NN，Cazevieill e C，Pergande G，et al．Induction of apopto sis in cultured human retinal pigment ep ithelial cells is counteracted by flupir tine．Invest Ophthalmol Vis Sci，1997，38∶1 390
4，Lindstrom RL．Advances in corneal preservation．Trans Am Ophthalmo l Soc，1990，88∶555
5，Lass JH，Mu sch DC，Gordon JF，et al．Epidermal growth factor and insulin use in corneal preser vation．Ophthalmology，1994，101∶352
6，Wilson SE，Li Q，Weng J，et al．The fa s-fas ligand system and other modulators of apoptosis in the cornea．Invest Ophth almol VIs Sci，1996，37∶1582
7，W ilson SE，He YG，Weng J，et al．Epithelial i njury induces keratocyte apoptosis：Hypot hesized role for the interleukin-1 syste m in the modulation of corneal tissue or angization and wound healing．Exp Eye，199 6，62∶325 上一页 [1] [2] |
