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2结果
2.1病理学观察 我们能观察视神经损伤后的组织形态和病理变化。正常视神经：伊红染色背景上均匀的分布着蓝染的细胞核。视神经在损伤后1d：损伤处为清晰的伊红染色浅的区域，这个染色浅区包含着很少量细胞核和红细胞。损伤区周围偶尔可见中性粒白细胞。损伤后3d：损伤区可见典型大量的有着活跃吞噬作用的泡沫样反应的小胶质细胞。损伤后7d：伊红染色浅区不清晰。可见损伤区存在增生细胞，细胞核排列不规则，密集在一起，偶尔可见有典型血管内皮细胞的新生血管芽。损伤区周围可见灶性成团的小胶质细胞（图1A）。损伤区也可见典型的泡沫样反应的小胶质细胞（图1B）。损伤后14d：损伤区伊红染色浅淡的区域不规则并散在大量深染细胞核，损伤区可见多处新生血管及少量小胶质细胞（图1C）。损伤后28d：损伤区细胞较前略有减少，偶尔仍可见泡沫样反应的小胶质细胞。损伤区高倍镜下可见网状纤维（图1D）。
2.2免疫组化结果 正常视神经有GFAP和CSPG的弱表达，视神经损伤后7d，损伤区中心缺乏GFAP的阳性表达，但在损伤区边缘表达稍高；而CSPG在损伤区的中心呈强阳性表达（图2A，B）。损伤后28d GFAP在损伤区表达仍部分缺失，CSPG在损伤区的表达近于正常。
3讨论
本实验中的动物模型为直接不完全视神经挤压伤，能避免损伤处形成死腔，很好的模拟临床状态，可重复性好。视网膜神经节细胞在视神经不完全损伤的最初2wk内大量迅速死亡[1]。在本实验中，视神经损伤区域内的小胶质细胞增生，在损伤后3～7d达到高峰，活跃的参与吞噬功能，14d时减少。这与Fleming等[2]研究的脊髓损伤后小胶质细胞增生的时间一致，Mari等[3]在视神经横断损伤的观察中，用小胶质/巨噬细胞的标记抗体（ED1）显示小胶质细胞在7d和14d时阳性表达水平高，21d时减弱，同我们的观察大致相符。神经损伤后小胶质细胞的反应和吞噬功能不足，而中枢神经又不利于血源性巨噬细胞的侵入和聚集，是可能导致CNS轴突再生失败的原因之一。
GFAP免疫组化证实在视神经损伤后7d，损伤区围绕瘢痕中心的细胞是反应型星形胶质细胞，同时，星形胶质细胞分泌的轴突生长阻抑成分CSPG沉积在损伤中心[46]。CSPG通常存在于空洞和活性组织的界面上，可能是作为一种活性星形细胞分泌的异位基底膜成分，包绕着CNS坏死空洞周围的细胞外基质，避免对周围活性组织造成进一步损伤。因此，很可能CNS用蛋白多糖作为屏障来避免水解酶对组织的进一步分解或继发的炎症损伤。但是视神经损伤处的CSPG沉积，客观上对轴突再生具有化学阻碍作用[7]。同脊髓的损伤修复相似，视神经在损伤后7d，新生血管开始长入损伤区，导致瘢痕形成。大鼠的视神经内无结缔组织，其支持组织为神经胶质，胶质细胞分布在神经纤维束间，形成支架性结构。损伤后7d，损伤区内的星形胶质细胞扩大并增生，数周后，原纤维性星形细胞和突起组成交织网，形成胶质瘢痕。虽然神经胶质细胞增生为神经损伤时的主要修复方式，但是，神经组织广泛破坏也能引起肉芽组织和胶原瘢痕形成。新生血管及肉芽组织的形成，同损伤后增生的星形胶质细胞一样，也是CNS损伤后的积极防御修复反应，但这种损伤修复反应客观上却造成了进一步的损害，形成的瘢痕组织也成了再生的路障,机械性的阻碍轴突再生。这些阻碍再生的因素确切与否以及机制还需作进一步研究。
【参考文献】
1张水华，黄厚斌，马志中.荧光金在视神经损伤研究的应用.哈尔滨医科大学学报 2003：37（4）：294296
2 Fleming JC, Norenberg MD, Ramsay DA, et al. The cellular inflammatory response in human spinal cords after injury. Brain2006;129(12):32493269
3 Dezawa M, Kawana K, Negishi H, et al. Glial cells in degenerating and regenerating optic nerve of the adult rat. Brain Res Bull1999;48(6):573579
4 Silver J,Miller JH.Regeneration beyond the glial scar. Nat Rev Neurosci 2004;5(2):146156
5 Castro C, Kuffler DP. Membranebound CSPG mediates growth cone outgrowth and substrate specificity by Schwann cell contact with the DRG neuron cell body and not via growth cone contact. Exp Neurol2006;200(1):1925
6 Xue LP, Ding P, Wu KL, et al. Expression of glial fibrillary acidic protein in retinal Müller cell of rats with glaucoma. Int J Ophthalmol(Guoji Yanke Zazhi) 2008;8(4):721725
7 Jiang WM,Tang LS.Factors of optic nerve regeneration. Int J Ophthalmol(Guoji Yanke Zazhi) 2005;5(3):543546 上一页 [1] [2] |
