【摘要】目的：研究体外培养人晶状体上皮细胞整合素的表达。
方法：对人晶状体上皮细胞株SRA01/04进行培养并传代，经间接免疫荧光标记法处理细胞后上流式细胞仪检测各整合素的阳性表达率。
结果：整合素α2，α3，α5，β1，β2在SRA01/04的阳性表达率分别为85.3％，97.6％，74.0％，97.7％，3.65％。整合素α3与β1之间无统计学差异（P>0.05），其余两两间比较均有显著统计学差异（P<0.01）。
结论：人晶状体上皮细胞株SRA01/04整合素呈阳性表达。
【关键词】 整合素 人晶状体上皮细胞 表达
Expression of integrins in cultured human lens epithelial cells in vitro
Gang Yao, ShaoJian Tan
Foundation item: National Natural Science Foundation of China (No.30760268)
Department of Ophthalmology, the First Affiliated Hospital of Guangxi Medical University, Nanning 530021, Guangxi Zhuang Autonomous Region, China; Department of Ophthalmology, the Peoples Hospital of Guangxi Zhuang Autonomous Region, Nanning 530021, Guangxi Zhuang Autonomous Region, China
Abstract
AIM: To study the expression of various integrin subunits in cultured human lens epithelial cells (HLECs).
METHODS: The HLECs, SRA01/04, was cultured. Flow cytometry (FCM) were used to detect the positive percentages of different integrin subunits in SRA01/04.
RESULTS: Our study showed that the HLECs line, SRA01/04 expressed α2, α3, α5, β1 and β2 integrin subunits. The positive percentages were 85.3%, 97.6%, 74.0%, 97.7%,and 3.65%,respectively.There were significant differences of positive expression percentages between each two integrin subunits (P<0.01), except for α3 and β1 (P>0.05).
CONCLUSION: The positive expressions of α2, α3, α5, β1 and β2 integrin subunits present in the HLECs line, SRA01/04.
KEYWORDS: integrin; human lens epithelial cells; expression
0引言
后发性白内障（posterior capsule opacification，PCO）又称后囊膜混浊，是白内障囊外摘除术后的主要并发症之一，其发生的主要机制为残留的晶状体上皮细胞（lens epithelial cells，LECs）增生、迁徙、分化以及胶原和基底膜样物质形成[1]。整合素是一类介导细胞与细胞、细胞与间质之间相互作用的细胞表面受体，广泛表达于多种细胞[2]。近年来研究表明，LEC表面亦表达多种整合素，可能对LEC的粘附、移行及增殖起促进作用，从而导致PCO的发生[37]。研究整合素在LEC的表达及其与PCO的关系，具有重要的临床意义。我们应用流式细胞仪准确测定人晶状体上皮细胞株SRA01/04上整合素α2，α3，α5，β1和β2的表达。
1材料和方法
1.1材料 人晶状体上皮细胞株SRA01/04由中国医学科学院基础医学研究所细胞中心提供。DMEM/F12培养基（Gibco公司）、胎牛血清（fetal bovine serum，FBS，天津灏洋TBD公司）、小鼠抗人整合素α2，α3，α5，β1，β2一抗（美国Serotec公司）、FITC标记的小鼠IgG1,k 同型抗体（美国BioLegend公司）、FITC标记山羊抗小鼠二抗（美国KPL公司）、流式细胞仪（美国Beckman Coulter公司）。
1.2方法 将人晶状体上皮细胞株SRA01/04移入25cm2培养瓶中，加入含100mL/L FBS的DMEM/F12培养基5mL，置于37℃，50mL/L CO2培养箱中培养，每天在显微镜下观察细胞生长情况，2～3d换液1次，3～4d后可见细胞相互融合，长满瓶底。此时进行消化传代：吸出培养液，用磷酸缓冲液(phosphate balanced solution, PBS)充分冲洗，加入2.5g/L胰蛋白酶及0.2g/L乙二胺四乙酸二钠(ethylenediamine tetraacetic acid, EDTA)混合消化液2mL，37℃温箱中消化约5～7min，置于显微镜下观察，待细胞皱缩后，加入完全培养基终止消化，反复轻轻吹打将细胞完全脱离瓶壁，移入离心管，800rpm离心5min，去除上清液，加入完全培养基重悬细胞，按1∶3传代，移入培养瓶，置于CO2恒温培养箱中培养。倒置相差显微镜观察：细胞属贴附型上皮样细胞，呈不规则多角形，镶嵌排列，细胞无色，折光性强。HE染色见胞质淡染呈红色，胞核呈蓝色，核仁多为1～2个。免疫组化观察α晶状体蛋白呈褐色阳性反应，对照组为阴性。 实验分对照管及实验管。对照管：I号为空白对照管，II号为同型抗体对照管（阴性对照）。实验管：按整合素α2，α3，α5，β1，β2分为5组，每组3管，结果取平均值。制备活性高的细胞悬液并调整细胞浓度为5×109～1×1010/L；取细胞悬液40μL加入所有对照管及实验管中，II号对照管中加入1 test（20μL）FITC标记的同型抗体，各实验管中加入40μL一抗(1∶50 )，然后各管加入1:20灭活正常羊血清50μL，轻轻吹打。置于4℃冰箱中孵育30min；用PBS洗涤2次，每次2mL左右，离心800r/min×5min；弃上清液，各实验管中加入FITC标记的二抗(1∶100)50μL，充分振摇。置于4℃冰箱中孵育30min；用PBS洗涤2次，每次2mL左右，离心800r/min×5min；加10g/L多聚甲醛固定液0.5～1mL；上流式细胞仪检测。
图1 人晶状体上皮细胞株SRA01/04各整合素流式细胞检测的表达（略）
统计学处理：用SPSS 13.0 for windows统计软件对各组数据进行χ2检验。
2结果
人晶状体上皮细胞株SRA01/04表达整合素α2，α3，α5，β1及β2，阳性表达率分别为85.3％，97.6％，74.0％，97.7％，3.65％，其中整合素β1和α3表达率最高，其次为α2和α5，最低为β2。同型对照管与空白对照管相比无统计学差异（χ2检验，P＝0.3443）。各整合素实验管（α2，α3，α5，β1和β2）阳性表达率均明显高于同型对照管（χ2检验，P<0.01）。整合素α3与β1之间阳性表达率比较无统计学差异（χ2检验，P＝0.737），其余两两间比较均有显著统计学差异（χ2检验，P<0.01，表1，图1）。
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