2.4移植术后的形态观察

　　2.4.1移植物标记法 1995年，Seiler等[25]报道了用来区分供体和受体视网膜组织细胞的两种方法：BrdU标记法和转基因法，可很好的区分供，受体组织细胞。1997年，Diloreto等[26]报道了用荧光素作为供体视网膜组织的染色剂，是一种短期有效的染色剂，是无毒的，对细胞生存力和分化无明显影响，可画图表示移植物的分布区域，并可进行扫描拍片。2003年，Warncke等提供了一种更好的标记方法：就是用Alu序列的ISH作为标记，这种方法与以往方法比较，其突出优点是能清楚的辨认移植细胞而不干扰细胞的新陈代谢和生物学行为，易于显影，甚至单个移植细胞也能被识别，并且它们的生活状态在短期或长期研究中均能观察到。用这种方法，我们可以保证供体细胞准确的注入视网膜下腔，结合免疫组化法，供体细胞也可与吞噬细胞区别开来，这些ISH方法的应用对于RPE移植后的研究具有重要价值。

　　2.4.2形态学观察 标记的宿主细胞和供体细胞比较容易区分，可采用光学显微镜，电子显微镜等进行形态学观察，荧光标记法，还可进行荧光扫描拍片观察。显微镜观察结合成像技术可记录细胞的生存状态及形态学特点，观察供体视网膜细胞与宿主视网膜细胞的整合情况。

　　3视网膜移植的效果

　　3.1影响视网膜移植效果的因素

　　3.1.1供体方面的因素

　　3.1.1.1供体组织的形状 游离细胞移植较易操作，创伤性小，但细胞不能维持正常极性，对视网膜功能恢复不明显;层细胞片移植手术难度大，但能维持正常细胞极性，减少花环形成，利于视功能恢复;颗粒状细胞移植介于前两者之间，免疫排斥反应较全层视网膜移植强。

　　3.1.1.2供体年龄 一般认为年轻的供体比年长的供体移植效果好。因随着年龄增长，黑色素和脂褐质的氧化毒性对RPE的正常功能的损害不断累积，使年长供者不能提供正常的移植成分。

　　3.1.1.3细胞来源 来源于胚胎视网膜的细胞分化能力好，致敏性小，植片易于存活并与宿主组织建立连接，特别是采用早期的胚胎细胞。人类的供体最适胎龄为14～18wk。尸体视网膜片多数来自成人，分化能力低，可能会造成排异。

　　3.1.2受体方面的因素 与受体视网膜损伤类型有关。视网膜损伤时间长，视网膜移植后易于形成斑痕。视网膜损伤越轻，移植后视功能恢复越好。感光细胞丢失或变性，内层神经视网膜保持完整时，移植后，移植物与宿主视网膜易于建立功能联系，利于视功能恢复；如果因RPE细胞的丢失，部分感光细胞丢失，则应进行带有RPE细胞的视网膜移植，视功能的恢复可能不如仅感光细胞丢失而RPE保持完整的患者。

　　3.2移植后的组织学变化

　　3.2.1感光细胞移植后的组织学变化 经过大量实验研究，发现移植的感光细胞形成了外节，且与受主RPE层紧密连接在一起。在受主和移植物之间的接触面可发现一层新生的突触层。移植的感光细胞与宿主的双极细胞形成视网膜的典型突触连接。电子显微镜下，可看到重建的感光细胞层。

　　3.2.2 RPE细胞移植后的组织学变化 RPE细胞移植后不但成活，并附着在受体眼的Bruch膜上，维持正常的基底与顶端的形态，而且与邻近的RPE细胞建立闭锁小带;移植的RPE不仅与受体眼的感光细胞紧密结合，而且可观察到受体眼的神经节盘膜正常脱落后被移植的RPE细胞吞噬。Litlle等曾做研究，第一次证明了人类胚胎RPE细胞移植能够拯救遗传性视网膜变性的光感细胞。移植后4wk，光学显微镜下细胞记数，移植区，外核层细胞层达3～4层，每100个显微视野感光细胞核数量为34.7±2.2;未移植区或对照组外核层几近缺失，每100个显微视野感光细胞核数量为3.5±1.4。移植的RPE细胞可阻滞感光细胞变。

　　3.2.3视网膜干细胞移植后组织学变化 胚胎视网膜细胞移植后至少生存5mo，虽长期生存率降低，但移植细胞会分化成熟形成一近似带有一些异常结构的视网膜结构。培养的视网膜祖细胞能保持不成熟状态，失去组织特异性，移植后能够整合到变性的视网膜，分化成神经原和神经角质细胞，甚至感光细胞。

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