陈春林 叶剑 尹小磊

第三军医大学大坪医院眼科 400042

目的 应用荧光金和和霍乱毒素B亚单位顺行示踪法评价视神经钳夹伤模型的制作方法 8～10周龄wistar大鼠10只，体重200～250g, 雌雄不拘，随机分为A、B两组，每组5只。麻醉后眼部皮肤消毒，在左眼上睑缘中央作垂直切口并向上延伸1cm后，作横行切口，长约1cm，整个切口呈“T”形，剪开穹隆部结膜，分离视神经鞘膜，用小号动脉夹在球后2mm处垂直于视神经水平轴夹持10s，右眼为假手术对照，只作视神经分离，不作钳夹；分别于术后即刻予2％FG 5ul溶液注射于A组大鼠双玻璃体腔，伤后6d时予1％ FITC标记的霍乱毒素B亚单位（CTB）溶液5ul注射于B组大鼠双玻璃体腔，仔细操作以避免损伤晶状体。四环素可的松眼膏涂双眼；术后7d时处死各组大鼠，行视神经冰冻切片，荧光显微镜下观察。

结果 A、B组假手术对照眼中均可见清晰标记的视神经轴突纤维，金黄色颗粒（FG标记）或绿色（CTB标记）颗粒沿视神经长轴呈线样排列，手术眼中视神经钳夹伤处清晰可见，钳夹近端见金黄色颗粒（FG标记）或绿色（CTB标记）颗粒沿轴突纤维线状排列，钳夹远端无轴突纤维被标记。

结论 荧光金除传统的逆行标记视网膜神经节细胞外，尚可顺行标记视神经轴突纤维，而CTB作为一种传统的顺行神经示踪剂，亦可清晰的标记视神经轴突，于8～10周龄大鼠应用小号动脉夹10s的视神经定量致伤，是研究视神经损伤与功能保护的理想模型。

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