刘旭阳  王宁利  陈晓明  P.L. Kaufman
    首都医科大学北京同仁医院眼科中心  四川大学华西医院眼科中心
    Dept of Ophthalmology & Visual Sciences, University of Wisconsin

    目的：探讨肌动蛋白降解基因表达降眼压治疗青光眼。

    方法：构建C3转移酶(C3)的腺病毒表达载体(AdC3) 、а链蛋白及其显性抑制突变体慢病毒表达载体 (FIVaCAT，FIVaCATm)。用上述载体(均同时表达绿色荧光蛋白， GFP)转导人类正常或经地塞米松处理的小梁细胞。观察 (1) 小梁细胞形态的改变；(2) 小梁细胞肌动蛋白、粘着斑蛋白、b-链蛋白的变化；(3) AdC3对地塞米松诱导的小梁细胞肌动蛋白交联网(CLANs)结构的影响。 将AdC3导入体外培养的猴眼前段组织，检测C3对液体流出易度的影响；将FIVGFP导入猴眼观察GFP在小梁的表达。

    结果： AdC3转导细胞收缩变园和变长；肌动蛋白细胞骨架裂解，相应粘着斑蛋白阳性的粘着斑减少或b-链蛋白染色丧失。与非转导细胞相比，对照载体转导细胞部分表现延长和排列不规则，但肌动蛋白细胞骨架，粘着斑蛋白或b-链蛋白染色均与非转导细胞类似。FIVaCATm转导小梁细胞引起的变化与AdC3类似。AdC3可降解由地塞米松诱导小梁细胞形成CLANs结构。器官培养结果显示，与基线和校正的AdGFP转导眼洗脱比较，AdC3转导眼液体流出易度增加90 ± 21% (p<0.001)。15 对眼中, 有11 对眼作用明显(反应眼),对比基线和校正对照眼洗脱后升高 118±23% (p<0.001)。一次性将FIVGFP导入猴眼后小梁GFP表达可持续454天。

    结论：病毒载体介导的肌动蛋白降解基因C3和а链蛋白显性抑制突变体眼内表达可望成为基因治疗降眼压治疗青光眼的有效方法。

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