|
3讨论
目前国内文献报道的兔角膜碱烧伤模型主要有2种：(1）是角膜缘缺陷模型[2]，采用14～16mm的大滤纸片覆盖整个角膜组织进行烧伤，但操作上使兔360°角膜缘完全暴露、并使滤纸不至于烧伤上下睑非常困难，必须去除第三眼睑，而且角膜表面是球形结构、大直径滤纸片难以在360°角膜缘均匀贴附；(2）在角膜中央采用直径<12mm不同大小滤片烧伤制作中重度碱烧伤模型[3]。我们对这类模型制作方法进行改进，将10mm滤片从上方角膜缘始均匀置于角膜表面，使滤纸均匀贴附90s，随即冲洗30mL生理盐水。改进的模型操作方便、不容易损伤眼睑，非麻醉状态下只须单手牵拉上睑，便可观察整个烧伤范围的变化，下方非烧伤区域相对轻的角膜水肿则适于对前房情况的了解，而且对于拟行自体组织工程角膜上皮移植眼，在角膜缘干细胞培养取材位置一侧的角膜缘往角膜中心贴附烧伤滤片，由于碱烧伤本身会破坏相应角膜缘处干细胞，因而不会因角膜缘组织的机械缺损影响结果的比较观察。目前临床开展的角膜缘干细胞移植术，主要包括自体或异体角膜缘组织移植和体外培养的角膜缘干细胞移植[4,5]。其中，采用体外培养技术，使用较少的健康角膜缘组织培养出适合较大面积移植的角膜上皮植片，不仅解决了供体来源不足问题，体外培养过程还可使角膜内的HIADR阳性朗罕细胞逐渐减少、从而降低异体组织的免疫原性[6,7]。本实验结果证实，在烧伤后14d内的早中期不同时间点，不论是自体还是异体的组织工程角膜上皮移植后，均明显促进了损伤角膜完整性的修复，抑制了碱烧伤后角膜溃疡的发生，为二期的增视性手术提供了基础，病理组织学也表明，移植组28d同种异体组织工程角膜上皮移植后角膜基质的炎性反应和新生血管生长与自体移植并无明显差异。
角膜缘干细胞缺乏的系列后遗症，主要包括上皮愈合延迟、不愈，角膜糜烂、结膜组织和新生血管长入等[810]，我们发现在移植后修复的角膜创面，上皮细胞形成复层修复，甚至形成伸向基质层的上皮突，有研究证实，修复的上皮细胞富含SOD,可有效地清除氧自由基，可显著抑制氧自由基间接激活胶原酶活性的作用,减少了对角膜组织的进一步损伤[11]。显然,本实验移植组术后角膜上皮始终保持完整光滑，与胶原酶活性受到抑制可能有关。
羊膜移植具有显著抑制碱烧伤角膜炎症反应和新生血管生长的作用，而不结合羊膜移植的单纯角膜缘干细胞移植同样有一定程度的抑制作用[12]，本实验结果也证实了后者,此外,本实验还发现，早期移植组（碱烧伤后1，3，6，9d各移植组）与中期移植组（碱烧伤后14d移植组）在角膜碱烧伤后1mo表现不同的特征，14d移植组角膜基质层的炎性细胞浸润与新生血管生长较对照组并无明显减少，而各早期移植组角膜基质深层的炎性细胞浸润与新生血管生长均受到了明显抑制，这提示角膜碱烧伤后尽早行组织工程角膜上皮移植对抑制新生血管生长和炎性反应更为有效。
综上所述，组织工程角膜上皮可促进碱烧伤的角膜创面尽快获得完整的眼表修复，为进一步的增视治疗和抗排斥治疗提供基础治疗，临床上对于角膜碱烧伤患者应尽可能于早期行组织工程角膜上皮移植治疗，为促使眼表完整性恢复，即使至中期亦不应放弃该手术治疗，角膜缘干细胞体外培养获得的同种异体和自体组织工程角膜上皮移植在短期内无明显差异，二者远期差异的观察有待进一步实验观察。
【参考文献】
1 Daniels JT, Harris AR, Mason C. Corneal epithelial stem cells in health and disease. Stem Cell Rev2006;2(3):247254
2刘海俊,钟世镇,余磊,等.角膜缘干细胞移植治疗兔眼表碱烧伤的实验研究.中国临床解剖学杂志2003；21（4）：365367
3刘琳,李永平,黄树其,等. KGF2治疗兔角膜中央碱烧伤的实验研究. 眼外伤职业眼病杂志2004；（6）：361365
4郭淑菊. 角膜缘干细胞移植在眼科的临床应用及发展. 中国组织工程研究与临床康复2007；2（15）：29442947
5周金子,夏晓波,杨卓,等.兔角膜碱烧伤后VEGF的表达与新生血管的关系.国际眼科杂志2007;7(6):15431546
6 Shimazaki J, Aiba M, Goto E, et al. Transplantation of human limbal epithelium cultivated on amniotic membrane for the treatment of severe ocular surface disorders. Ophthalmology 2002;109(7):12851290
7皮裕琍.角膜缘干细胞移植的临床研究进展.感染、炎症、修复2007；8（12）：251253
8 Boulton M，Albon J. Stem cells in the eye. Int J Biochem Cell Biol 2004；36(4):643657
9 Fogla R, Padmanabhan P. Deep anterior lamellar keratoplasty combined with autologous limbal stem cell transplantation in unilateral severe chemical injury. Cornea2005;24(4):421 425
10郑晓汾,冯克孝,李冰,等.兔角膜碱烧伤后不同时期的组织病理学变化.国际眼科杂志2005;5(3):449 450
11杨红,向艳,顾其胜,等.几丁糖促进兔角膜碱烧伤愈合的作用. 华中科技大学学报医学版2005；34（2）：245248
12 Fogla R, Padmanabhan P. Deep anterior lamellar keratoplasty combined with autologous limbal stem cell transplantation in unilateral severe chemical injury. Cornea2005 ;24(4):421 425
上一页 [1] [2] |
