侯豹可
解放军总医院眼科 北京 100853
目的 从整体角度出发，应用国际新兴的蛋白质组学实验研究方法，对CNV动物模型视网膜脉络膜异常蛋白质进行筛选以及鉴定，为后继CNV的新药靶研究提供分子参考。
材料与方法 8只BN大鼠充分散瞳、麻醉后随机选取一眼作为实验眼，647nm氪激光光凝试验眼视网膜20点。激光参数：功率 300mW；光斑直径100μm，曝光时间 0.05s。另一眼为对照眼。光凝后4W行FFA检查，确认CNV生成，处死动物行病理切片观察以及提取动物视网膜蛋白，液氮冷冻以备蛋白质组学鉴定。提取蛋白标本后进行等电聚焦电泳（IEF），根据蛋白质等电点（pI）不同加以分离，随后行十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE），垂直于IEF的方向进行电泳，根据蛋白质分子量的不同，将样本进行第二次分离。采用考马斯亮蓝染色法对于凝胶进行显色固定，扫描仪获取图像。使用Image Master 2D Elite软件对图像进行分析配比，筛选出CNV组/正常组视网膜表达明显差异的蛋白质斑点，随机选取差异斑点进行质谱分析（MS），数据经蛋白质组数据库检索得出差异表达蛋白。
结果 BN大鼠氪激光光凝眼视均有CNV的生成；正常对照组视网膜-脉络膜2-DE平均分离蛋白斑点405个，组内蛋白斑点匹配率90.26%，CNV组436个，匹配率91.63%。CNV组与正常对照组组间匹配率为89.22%，发现Volume值改变≥2.0倍的点共44个差异点白质斑点，其中21个表达量上调， 23个下调。随机选取9个蛋白斑点应用MALDI-TOF-MS分析鉴定蛋白（成功鉴定7个，2个为蛋白混合物或未知蛋白）：表达上调的为真核起始因子5A，线粒体ATP酶D链、Cu，Zn-超氧化物歧化酶、内质网蛋白ER29以及转甲状腺蛋白D链；表达下调的为μ-晶体蛋白和NAD异柠檬酸脱氢酶α。
结论 经检索，本研究为首次应用蛋白质组学方法对大鼠CNV模型进行差异蛋白表达的研究；大鼠CNV的发生过程中多种蛋白质表达改变；表达差异的蛋白可导致蛋白质合成旺盛，线粒体功能增加，抗氧化能力增加而细胞的有氧代谢水平下降；蛋白质组学研究为CNV相关疾病的研究提供了一个很好的参考平台。
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