【摘要】 目的：考察透明质酸酶(hyaluronidase, HS)兔眼内注药诱导形成玻璃体后脱离（posterior vitreous detechment,PVD）的作用。方法： 取新西兰大白兔20只,将HS 5U注入20只右眼玻璃体腔内，左眼内各注入等量生理盐水作为对照。在设定的时间点(15min～7d)，通过活体的直、间接眼底镜、视网膜电图（electroretinogram,ERG）检查和摘除眼球的光、电镜检查，从形态学方面对酶作用于玻璃体的效应及其眼部毒性进行观测。结果：在实验观察期内，实验眼从第3d开始有肉眼可见的PVD形成；所有眼ERG b波振幅(bA)注药前后比值没有明显差异；光、电镜下视网膜的各层结构在玻璃体注射后无明显改变。结论：玻璃体腔内注射5U HS酶可有效地诱导产生PVD，而且对视网膜的结构和功能无毒性损害。
【关键词】 透明质酸酶；玻璃体后脱离；兔
Posterior vitreous detachment induced by intravitreal injection of hyaluronidase in the rabbit
GeFei Zhu,Bo Qin,XingHua Xi,XiuZhen Zhou,Ting Zeng
Foundation item: Science and Technology Plan Program of Shenzhen City, Guangdong Province, China(No.200603164)
Department of Ophthalmology, Shenzhen Peoples Hospital, the Second Affiliated Hospital of Jinan University, Shenzhen 518020, Guangdong Province, China
Abstract AIM: To study the effect of pharmacologic induction of posterior vitreous detachment (PVD) by intravitreal injection of hyaluronidase (HS). METHODS: 5U of HS was injected into the vitreous cavity of twenty right eyes of New Zealand white rabbits. The left eyes,intravitreally injected by same volume of NS,were considered as control.Observation period was from 15 minutes to 7 days.Ophthalmoscopy, electroretinography(ERG)and histological examination were performed to assay morphologically the enzymess effectiveness to produce PVD and their probable toxicity to the retina.RESULTS: During the observation period, clinical PVD found by naked eye could be successfully induced in the right eyes on the third postinjection day; no statistical difference was found in the value of ERGbwave amplitudes (bA) ratio; and histological examination showed normal structure of the retina in the treated eyes.CONCLUSION: Intravitreal injection of HS can induce PVD successfully, and is safe to the retinas structure and function of the rabbit eyes.
KEYWORDS: hyaluronidase; posterior vitreous detachment;rabbit
0引言
玻璃体切割手术是目前去除玻璃体后皮质（posterior vitreous detachment,PVC）的有效方法，但单纯机械性的操作从视网膜表面上完整地剥除皮质有时非常困难，特别是在婴幼儿和青少年患者的手术中[1]。如果在手术前发生了玻璃体后脱离（posterior vitreous detachment，PVD），则可简化手术操作、减少手术并发症，取得更好的手术效果。因此，通过药物来分离PVC，促使PVD发生有着重要的临床意义[2]。本研究中，我们将透明质酸酶[3](hyaluronidase, HS) 5U注入兔眼玻璃体腔内，观察其诱导产生PVD的情况和药物应用的安全性。
1材料和方法
1.1材料
体健无眼疾新西兰大白兔20只，体质量1.8～3.0kg，雌雄随机分配。透明质酸酶(HS)为美国Worthington公司生产，2～8℃下保存，使用时将粉剂用9g/L NS溶解稀释,终浓度50U/mL[4]。
1.2方法
以20只右眼为实验组，玻璃体腔内注入0.1mL酶（5U HS）；各兔的左眼内注入0.1mL NS作为对照组。自兔耳缘静脉注入30g/L戊巴比妥钠液(25～30mL/kg)麻醉，固定头部充分开睑，抗生素眼液冲洗结膜囊，表麻下行前房穿刺抽取约0.1mL房水；在颞上方角膜缘后2mm处，直视下缓慢注入0.1mL药物（左眼为NS）至玻璃体腔中央。所有的操作由同一术者完成。药物作用的观测时间为注射后15，60min；1，3，7d(表1)。于注药前及上述各时间点，在裂隙灯和直间接眼底镜下观察眼前后节的情况。用重庆泰克TEC150V型视觉电生理诊断仪，依标准程序测定双眼全视野暗适应ERG最大反应的b波振幅(bA)值。活体检查后，深麻醉下摘除动物眼球，福尔马林液固定，前后向纵行剖分成3部分，取中间一份制石蜡标本，HE染色，光镜（LE）观察视网膜结构和PVD等形态学改变。在LE观察有阳性或可疑的组别中，随机选取2～4只眼球（表1），完成前述检查后摘除，在多聚甲醛戊二醛混合液中固定24h，前后向将眼球剖分为4份，取中间2份：1份如上制LE片,另1份在视乳头下方2mm处取全层组织，常规行透射电镜(TEM)制片，在日产H600型透射电镜下观察视网膜结构的改变和PVD发生的情况。表1 实验分组、注射药物及观测的项目和时间（略）表2 注射后bA/注射前bA比值(略)
统计学分析：计算各眼注药后与注药前的bA比值。所有数据以均数和标准差(±s)表示，进行两因素方差分析，并对两组间相同的时间点进行多重比较。显著性检验水准以P<0.05为有意义。
2结果
2.1裂隙灯、眼底镜检查
对照组在各时间点于注射前后均无明显改变。实验组于15，60min和1d，所有眼均有睫状体充血、浅前房及玻璃体混浊，轻度的眼底血管充盈、曲张。反应随观察时间延长而减轻，7d时所有眼恢复正常。3，7d分别有1/8，2/4眼有程度不等的PVD发生。所有眼都没有视网膜出血等毒性改变。
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