眼科病理             605                                      AB1071

　　-70℃反复冻融对人眼脉络膜黑色素瘤细胞OCM-1作用及其机制的实验研究

　　刘斌   李永平*   张波   张文忻   李彦峰  彭展

　　广州中山大学中山眼科中心 510060

　　目的  研究-70℃反复冻融对人眼脉络膜黑色素瘤细胞系OCM-1的作用及其机制。

　　方法 OCM-1细胞经冻融处理后,使用噻唑蓝比色法检测细胞的杀伤情况，采用克隆（集落）形成实验观察细胞生长能力，用HE染色观察细胞的形态学改变，免疫组织化学方法检测冻融对细胞P16表达的影响，共聚焦显微镜观察冻融后细胞凋亡和坏死的形态改变，并测定细胞的凋亡比率，流式细胞仪检测冻融前后细胞CD40表达比率及细胞膜电位的变化。

　　结果　噻唑蓝比色法检测显示冻融可以直接杀伤细胞，克隆形成实验表明冻融后残存的OCM-1细胞生长能力明显受抑制(P < 0.01)，且均与冻融时间及冻融次数相关。HE染色可见OCM-1细胞在反复冻融后呈现不同的形态改变。免疫组织化学染色见未处理的细胞P16阳性，而冻融后的细胞均呈阴性，冻融后培养的细胞部分呈阳性。共聚焦显微镜观察到冻融后细胞的坏死和凋亡等变化，并发现同一冻融时间，凋亡细胞随着冻融次数的增加而增多，达到一定程度后随着坏死细胞的增加反而减少。流式细胞仪测定发现冻融前后CD40阳性细胞比率有很大的差异(P < 0.01)，并可见冻融后细胞膜电位下降。

　　结论　冻融不仅可以明显杀伤肿瘤细胞，诱发大量的肿瘤细胞发生凋亡,还能抑制残存的细胞生长。其机制是通过降低膜电位，改变膜的通透性，引起细胞内线粒体等细胞器的不可逆损伤；染色质的浓缩，凝集，边集，并诱发肿瘤坏死因子CD40的持续表达；阻止残余细胞的分裂增殖。冻融时间相同，冻融次数不同，细胞的杀伤比率有显著差异；冻融次数相同，冻融时间不同，细胞的杀伤比率也不同，但差异不如前者明显，这为临床采用短时间多次法冷冻治疗眼内肿瘤提供了实验依椐。
　
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