眼科病理             2642                                      AB1099

　　PKC-ζ参与调节SDF-1刺激的U937细胞的VEGF的mRNA转录

　　李鹏程

　　华中科技大学同济医学院附属协和医院眼科 430022

　　目的  巨噬细胞是重要的炎症细胞，也是趋化因子SDF-1的靶细胞。构建针对蛋白激酶C-ζ（PKC-ζ）的短发夹RNA表达质粒，观察其对人U937细胞的PKC-ζ表达的抑制作用，以及转染后细胞对SDF-1刺激的VEGF的mRNA转录的反应，为明确SDF-1的细胞内信号分子相互作用奠定基础。

　　方法  设计合成一对针对人PKC-ζ的mRNA的寡核苷酸序列，退火后将其连入载体。对重组质粒pSIRENp进行酶切鉴定。用人U937细胞株进行培养传代，脂质体介导的方法分别将质粒pSIRENp转染U937细胞，用RT-PCR检测转染对PKC-ζ表达的影响，并检测转染前后的U937细胞对SDF-1刺激的VEGF的mRNA转录情况。

　　结果  酶切证实目的寡核苷酸片段已经被克隆到pSIRENp，转染pSIRENp质粒可以几乎完全抑制U937细胞的PKC-ζ表达；SDF-1刺激前后细胞VEGF的mRNA转录均较对照明显下降。转染对照质粒对细胞PKC-ζ及SDF-1刺激的反应均无明显影响。

　　结论  成功构建了人PKC-ζ基因的短发夹RNA表达质粒，其对U937细胞的PKC-ζ表达有显著抑制作用，细胞的基础VEGF和SDF-1刺激的VEGF的mRNA转录均较对照明显下降。PKC-ζ可能通过影响NF-kappa B 活性而参与调节U937细胞VEGF转录。

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