眼科病理             2387                                      AB1090

　　质粒介导RNA干扰抑制视网膜母细胞瘤细胞血管内皮生长因子表达

　　贾仁兵  王晓莉  范先群

　　上海交通大学医学院附属第九人民医院眼科 200011

　　目的  探讨血管内皮生长因子（VEGF）短发夹RNA（shRNA）表达质粒稳定转染对视网膜母细胞瘤（RB）细胞VEGF表达的作用

　　方法  构建VEGF shRNA表达质粒p4.1CMV-VEGF shRNA，脂质体介导其转染SO-RB50细胞和HXO-RB44细胞，新霉素筛选结合梯度稀释法获得p4.1CMV-VEGF shRNA阳性RB细胞单克隆，继续培养扩增建立p4.1CMV-VEGF shRNA阳性RB细胞，用荧光定量PCR（FQ-PCR）方法检测RB细胞中VEGF基因表达，并用酶联免疫吸附测定（ELISA）方法检测RB细胞上清中VEGF蛋白表达；以与哺乳动物基因组无同源性的shRNA的表达质粒p4.1CMV-Neg shRNA作阴性对照，同时以未做任何处理组作空白对照。

　　结果  成功构建p4.1CMV-VEGF shRNA并建立其阳性RB细胞。对于SO-RB50细胞，阴性对照组和空白对照组VEGF基因表达量分别为实验组的5.02倍和6.32倍，对于HXO-RB44细胞，其对应的值分别为5.70倍和4.86倍。实验组SO-RB50细胞上清中VEGF蛋白浓度（187.69±83.89pg/ml）显著低于阴性对照组和空白对照组（822.98±187.98pg/ml和865.76±170.33 pg/ml）（均p<0.01），实验组与两对照组HXO-RB44细胞上清中VEGF蛋白浓度也存在显著性差异（162.20±66.33pg/ml 对 828.22±145.94 pg/ml 和764.33±164.79pg/ml）（均p<0.01）。

　　结论  VEGF shRNA表达质粒稳定转染可高效抑制RB细胞中VEGF表达，靶向VEGF的RNA干扰可望成为治疗RB的新途径。

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