白内障             55                                      PO0001

    BMP7对转基因小鼠晶状体细胞作用的研究

    苑晓勇 陈卓 孙慧敏

    天津医科大学眼科中心   300070

    目的：白内障是目前国内最重要的致盲眼病，与晶状体细胞的发育关系密切，了解发育信号分子对晶状体细胞的作用，对于了解晶状体细胞的发育规律，进而揭示白内障的发生有重要意义。本研究利用晶状体特异性表达蛋白A-晶状体蛋白的启动子驱动人BMP7，制备了在晶状体特异性表达人BMP7的转基因小鼠模型，以进一步了解小鼠晶状体基本发育完全时（P20、P30）转基因BMP7对小鼠晶状体细胞的作用。

    方法：采用DNA重组技术构建转基因A-BMP7，经质粒载体大量扩增、酶切、胶分离及纯化等分子生物学技术获得目的基因片段，采用显微注射法制备A-BMP7转基因小鼠模型，PCR和斑点杂交检测小鼠转基因的整合，原位杂交检测转基因表达，病理证实白内障发生，TUNEL检测晶状体细胞凋亡，免疫组化检测Caspase 3、Cyclin B1、Cyclin D1及钙粘连素E的表达。

    结果：1.构建A-BMP7转基因，经酶切和测续验证无误，获得显微注射片段。

    2.采用显微注射法将A-BMP7转基因注入FVB/N小鼠受精卵内，原核注射和细胞质注射组均获得转基因小鼠，并经PCR、斑点杂交验证转基因整合，原位杂交、晶状体表现及病理验证其表达。

    3.Caspase 3介导转基因小鼠P20、P30大量晶状体细胞凋亡。

    4.转基因小鼠P20、P30晶状体增殖区上皮细胞和部分纤维细胞Cyclin D1表达阳性，对照小鼠晶状体表达阴性，提示转基因BMP7导致该部位细胞进入G1早期；而转基因小鼠与正常对照小鼠晶状体对Cyclin B1表达差异不明显，提示转基因BMP7并未导致晶状体细胞G2/M异常。

    5.转基因小鼠P20、P30晶状体上皮细胞钙粘连素E阳性表达，而纤维细胞阴性表达，与正常对照小鼠晶状体对钙粘连素E表达部位相一致，提示转基因BMP7并未明显改变上皮的属性。转基因小鼠P30前囊下上皮细胞表达钙粘连素E强度较对照降低，可能由于大量细胞凋亡导致，并参与白内障的形成。而P20转基因小鼠和正常对照表达差异不明显。

    结论：转基因BMP7导致的晶状体细胞凋亡直接参与白内障发生；其造成的晶状体增殖区上皮细胞和某些纤维细胞进入G1早期，影响晶状体细胞正常的细胞周期，也与白内障生成有关；转基因BMP7导致钙粘连素EA-BMP7转基因小鼠P30前囊下晶状体上皮细胞表达下调，与白内障发生可能互为因果。

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