王玮  姚克  申屠形超  金冲飞  蒋劲

浙江大学医学院附属第二医院眼科中心310000

目的：比较P23T突变型CRYGD晶状体蛋白与野生型CRYGD在永生化人晶状体上皮细胞(HLEB-3)中的定位特点，初步了解CRYGD基因P23T突变导致先天性白内障的发生机制。

方法：将野生型和P23T突变型CRYGD基因定向克隆到真核表达质粒pEGFP-C1上，得到pEGFP-CRYGD和pEGFP-P23T CRYGD融合载体，经测序鉴定后，转染至HLEB-3细胞，经Western-blot鉴定和G418筛选后建立稳定表达CRYGD、表达P23T突变CRYGD和空质粒转染HLEB-3细胞系，使用荧光显微镜观察蛋白在细胞内的表达和定位特点。

结果：Western-blot证实野生型和突变型CRYGD在HLEB-3细胞中成功表达，荧光显微镜下发现pEGFP-C1空质粒定位于细胞核，野生型CRYGD分布于细胞核和胞浆，而突变型CRYGD仅在细胞浆中表达。

结论：P23T突变导致CRYGD在晶状体上皮细胞中定位发生改变，这种改变可能是先天性白内障的发生机制之一。

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