基础             3437                                      PO0171

　　TGFβ2特异性siRNA质粒对人Tenon’s囊成纤维细胞增殖及功能的影响

　　王明婕 马建民 赵家良

　　北京协和医院眼科 100730

　　【目的】青光眼滤过性手术是目前治疗青光眼的主要手段，但术后滤过泡瘢痕化往往会导致手术的失败。在眼部手术创伤愈合过程中，TGF-是参与伤口愈合和纤维化的重要调控因子，能够调控成纤维细胞的多种生理功能，在滤过泡的纤维化过程中发挥了重要的调节作用。本实验应用干扰RNA方法抑制人胚胎眼Tenon’s囊成纤维细胞(HFTF)内TGF-2的表达，以确定该方法能否抑制HFTF细胞增殖、迁移、分泌胶原蛋白的功能，从而抑制青光眼滤过术后滤过泡的瘢痕化，提高手术成功率。

　　【方法】将干扰RNA质粒p932-siTGF2用脂质体法转染入HFTF后，分别采用Western Blotting和免疫荧光方法对TGF-蛋白表达进行检测，并用Real-time RT-PCR方法对TGF- mRNA进行检测。进而，又采用Western Blotting和免疫荧光方法对Collagen蛋白表达进行检测，并采用MTT法检测和观察抑制TGF-蛋白表达后对细胞增殖和迁移功能的影响。

　　【结果】干扰RNA质粒p932-siTGF2转染入HFTF 24 h后，可降低TGF-mRNA表达量约47.5%，同时采用Western Blotting方法检测发现抑制TGF-蛋白的表达，具有时间依赖性，即转染后24 h抑制效果最明显，可使蛋白表达量下调约60％，48 h后也有部分抑制作用，蛋白表达下调约13％，但72 h后抑制效果消失。免疫荧光方法也检测到细胞胞浆内TGF-蛋白表达下调。此外，HFTF转染siRNA质粒24 h后，还可同时抑制CollagenⅠ的合成、分泌，使之表达量下调约76％，并可抑制HFTF细胞迁移的生物学行为及增殖能力，转染siRNA质粒72 h后的HFTF细胞活力下降约13％、84 h后细胞活力下降约25％。

　　【结论】采用干扰RNA方法可在体外实验中有效地抑制HFTF细胞内TGF-蛋白的表达，进而影响其生理功能，抑制细胞增殖、迁移和胶原蛋白的分泌、合成，从而可能会有效地抑制创伤的瘢痕化。采用干扰RNA方法抑制TGF-的表达是一种潜在预防术后创口瘢痕化、滤过泡纤维化的有效途径。

　　声明:本站独家报道，转载须标明来源“中华眼科在线”