青光眼 1676 PO0478
中国汉族原发性先天性青光眼CYP1B1基因突变研究
李茅,陈晓明,刘娅利,盘如刚,刘东敬,李妮,鲍捷,代艳
四川大学华西医院眼科 610041
目的:了解中国汉族原发性先天性青光眼(PCG)CYP1B1基因编码区核苷酸变异情况。
方法:1. Omega E-Z 96 血液基因组DNA提取试剂盒或酚-氯仿法提取44例中国PCG患者以及5例与患者无亲缘关系无眼部疾患的正常对照外周血白细胞基因组DNA。采用两对引物扩增CYP1B1基因编码区全长序列。以三条测序引物对纯化后的PCR产物测序,与野生型序列比较找出核苷酸变异位点。2.生物信息学评价核苷酸变异的位置保守性、可能导致的表型效应以及蛋白质空间构象变化,对照已经发现的SNP 和突变,了解测序所得核苷酸变异的生物学意义。
结果:1.测序得到44例患者和5例正常对照CYP1B1编码区DNA序列。经多序列比对检出18个核苷酸变异位点,其中1个位于非编码区内含子1,9个位于外显子2,8个位于外显子3。有13个变异位点只有杂合性变异,占所有变异位点的72.2%,有4个位点兼有杂合性变异和纯合性变异,占所有变异位点的22.2%,1个位点只有纯合性变异,占所有变异位点的5.6%。在PCG患者和正常对照中都发现的变异有9种,占50%。仅在PCG患者中发现的变异有8种,占44.4%,有1种变异仅在正常对照中发现,占4.6%。2.在中国PCG患者中发现的核苷酸变异属于已经发现的SNP共6个,分别为3973 T>C(rs2617266)、3947 C>G(rs10012)、4160 G>T(rs1056827)、4534 G>C(rs9341249)、8131 G>C(rs1056836)、8184 C>T(rs1056837)。中国汉族PCG患者中CYP1B1的基因内最常见单倍型为3793C-3947C-4160G-4534G- 8131C-8184C。18个核苷酸变异中有7个突变,导致的氨基酸变异为279H>Q、320 V>L、363V>F、370P>L、390R>H、469R>W以及473 E>K。
结论:44例中国汉族PCG患者CYP1B1基因编码区测序结果满意。对测序结果采用多序列比对进行初步分析,我们发现了CYP1B1基因编码区的18个变异,其中包括11个SNP和7个突变。7个突变都为错义突变,改变了CYP1B1蛋白的保守性氨基酸,影响CYP1B1蛋白参与分子折叠以及血红素结合的结构域,改变了蛋白的空间构象。
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