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2结果
2.1小梁细胞的形态学观察 光镜下，原代细胞从组织块生长出来时形态各异：梭形、三角形、多角形，细胞突起与相邻细胞的突起彼此相连呈桥状。融合后细胞形态以上皮型为主，呈多角形，不规则三角形，扁平贴壁，胞质丰富，核圆居中，细胞内含少许色素颗粒。透射电镜下，小梁细胞胞质内细胞器丰富，许多粗面内质网池、核糖体，大的高尔基复合体，溶酶体可见，线粒体圆形，粗面内质网及核糖体较多，少量溶酶和圆形脂滴，核内常染色质丰富，核大居中。NSE染色阳性，表达vimentin，不表达ⅧAg，证实所培养小梁细胞的神经外胚层神经嵴间充质起源。综上所述，证明所培养的细胞是小梁细胞。
2.2高糖对小梁细胞形态的影响 高糖组与对照组相比较细胞形态有明显变化。光镜示，在高糖组，小梁细胞数量减少，贴附性差，体积缩小，突起减少。电镜示，小梁细胞胞质内细胞器减少，内质网、高尔基复合体、线粒体等细胞器肿胀，溶酶体及脂肪滴增多，核浆比减小，可见凋亡小体（图1）。
2.3高糖对小梁细胞增殖的影响 见表1。
2.4高糖对小梁细胞凋亡的影响 用流式细胞分析技术分别检测两组细胞(图2)，高糖组与对照组比较，前者细胞的凋亡率(图右侧象限UR +LR)小于后者，而活细胞比率(图左侧象限UL +LL)大于后者，差异均有统计学意义(P<0.05)。
3讨论
众所周知，房水主要通过小梁网途径和葡萄膜巩膜途径离开眼球，其中将近50%～75%的房水通过小梁网途径外流。此途径由葡萄膜小梁、角巩膜小梁、近管区小梁、Schlemm管内壁、Schlemm管和集合管以及房水静脉构成。小梁网是房水循环的关键部位。研究表明：小梁网结构异常、小梁网细胞肌动蛋白细胞骨架交联网的形成、小梁细胞外基质的合成过多及沉积等因素均可引起房水外流受阻。POAG眼压升高是由于房水排出通道有病理改变, 使房水排出阻力增加，其病变部位在小梁网。小梁网作为一种自身清除滤过系统，能够排出房水，清除房水中细胞碎片和微粒，而这种清除功能主要由小梁细胞完成[11]。此外，在近管小梁网中，在其网状结构网孔中有大量的小梁细胞和细胞外基质，因此小梁细胞成为影响房水外流的一个重要因素。研究发现，小梁细胞本身的收缩状态可引起小梁网细胞间隙变小，从而导致小梁网通透性下降，进而影响房水外流。因此若能缓解小梁网细胞的收缩状态，可增加房水外流。当然，胞外基质及细胞之间的黏附性、细胞骨架结构以及房水相关成分TGFβ也均参与房水外流的调节[12] ，并不同程度地影响眼压值的变化。我们通过相差显微镜及透射电镜下观察小梁细胞形态变化发现：在高糖条件下，小梁细胞活性下降，功能降低，存活能力下降。本实验MTT检测结果和凋亡率的测定结果为小梁细胞的形态改变提供了依据。国外有大量研究表明，在高糖条件下，小梁细胞外基质成分蓄积，Ⅳ型胶原的增加，从而导致房水流出通道的阻力增加，使眼内压升高。由此推测：降低糖的浓度可降低病理状态下各种小梁细胞外基质成分的过度表达[5,13]。本研究也证实了该结论。在高糖的作用下，小梁细胞的增殖能力下降，凋亡率增加，从而使小梁细胞的功能降低，使近管小梁网的网状结构改变，网孔变小，导致眼内压升高。我们推测，高糖可能通过以上两个方面作用来共同升高眼内压。本研究从一个侧面解释了糖尿病患者易并发POAG的机制，并对指导糖尿病并发POAG患者的临床用药提供了重要依据。
图1 高糖作用后小梁细胞的形态变化（略）
A：对照组（×20000）；B：高糖组（×20000）；C：高糖组中的凋亡小体（×3500）
图2 流式细胞仪检测的活细胞和凋亡细胞在对照组（A）和高糖组（B）中的百分比(%) （略）
UL(左上)：未被PI染色的细胞，UR(右上)：被PI染色的细胞；LL(左下)：未被AnnexinV染色的细胞；LR(右下)：被AnnexinV染色的细胞。图片下方读数为相应象限内的细胞数占总细胞数的百分比
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