2.3 Western blotting结果
RLECs在不同Dex浓度作用下，β晶状体蛋白的表达情况（图3），电泳结果分别为37kDa的GAPDH和29kDa的β晶状体蛋白，GAPDH在各组表达稳定，无明显差异（P>0.05），将吸光度比值（βcrystallin/GAPDH）作为β晶状体蛋白的相对表达量，分别为0mol/L组1.38±0.16，108mol/L组1.07±0.11，107mol/L组0.97±0.04，106mol/L组0.62±0.12，组间差异显著（P<0.05），组间两两比较，差异均显著（P<0.05），提示Dex可抑制β晶状体蛋白的表达，抑制程度在一定范围内随Dex浓度升高而增加（图4）。表1 PCR引物（略）
3讨论
自Black等［1］1960年报道全身应用激素可引发白内障后，许多文献也报道了全身、局部应用及吸入糖皮质激素等途径都可以导致白内障的发生［24］，这种激素性白内障（GIC）以后囊下混浊（PSO）为特征，其组织学变化表现为晶状体前囊、前部皮质及核区相对正常，病理改变主要发生在晶状体后部，上皮细胞向后囊部迁移，后极部可见上皮细胞出现，晶状体纤维细胞肿胀、排列紊乱、核伸长，后囊下皮质区不同程度圆形病变（circular lesions）及空泡等［5,6］。其临床特点主要是，一般在使用激素1a左右发生后囊下混浊，儿童较成人对激素更敏感，局部应用激素较全身应用更易发生GIC，GIC一旦形成并影响视力，停用激素并不能使GIC减轻或恢复正常，一般都伴随有激素性高眼压或激素性青光眼。有关GIC的发病机制非常复杂，有代谢紊乱、渗透压异常、氧化构象损伤、蛋白加和物形成、激素受体介导等多种假说，都不能很好地解释GIC主要表现为PSO，而晶状体核及前部皮质区相对正常这个特点。Jobling等［7］根据GIC晶状体后囊下可见未分化的上皮细胞堆积，推测上皮细胞分化异常可能与GIC形成有关，提出细胞异常分化学说，认为激素可能通过间接或直接作用于晶状体上皮细胞（LECs），引起异常增殖与分化，表现为增殖至赤道部的上皮细胞不能正常分化为晶状体纤维细胞，不能向晶状体核区移动，而是继续增殖并越过赤道部向后囊移行，从而在后囊区堆积形成PSO。
我们通过地塞米松Dex对LEC的直接作用，来了解激素对LEC增殖与分化的影响。结果显示，Dex在108，10 7，106mol/L浓度下，既能促进LEC的增殖，也可抑制LEC中β晶状体蛋白在转录及蛋白水平的表达，β晶状体蛋白是晶状体上皮细胞分化的标志蛋白［8］，它在LEC中并无表达，只是在LEC开始伸长并向晶状体纤维细胞分化时才表达，因此Dex降低β晶状体蛋白的表达说明，Dex可抑制LEC的分化，与James等［9］结论相似。局部应用Dex眼液后，房水中的Dex浓度约为31～60mol/L［1012］，在我们实验中，107mol/L（39g/L）浓度的Dex（分子量392.5）与用药情况下的房水Dex浓度相似，可反映出Dex对LEC的实际影响，即促进增殖、抑制分化的作用，支持细胞异常分化学说的观点，可能在PSO形成过程中有一定的作用。有关Dex对LEC增殖的影响，各家报道不一致，何涛等［13］报道106mol/L的Dex可抑制白内障LEC增殖，McDonnell等［14］报道Dex可抑制LEC的增殖，但由于所应用的Dex浓度较高（100g/L），明显高于用药情况下房水中Dex的浓度。因此，还需要在多种浓度下，采用多种方法研究Dex对LEC增殖的影响，明确LEC增殖变化在PSO形成机制中的作用。
在Dex对LEC的间接影响方面，细胞分化异常学说认为，Dex可影响房水中某些生长因子的含量，如具有细胞增殖作用的bFGF增加，具有细胞分化作用的TGFβ减少，也使得赤道部的上皮细胞不能正常分化而移行至后囊区。McAvoy等［15］还发现，bFGF在眼内从前到后呈现逐渐增加的浓度梯度，前房中低浓度的bFGF促进上皮细胞增殖并向赤道部移行，赤道部高浓度的bFGF诱导LEC分化成纤维细胞，也有研究［16］发现玻璃体腔中含有高浓度的bFGF，如果将晶状体前后倒置，也可以诱导LEC发生分化。房水中生长因子异常可以导致LECs行为异常，如TGFβ较低时则不能刺激LEC向纤维细胞分化，低浓度的bFGF也可以抑制LECs分化，而未分化的LEC则继续接受增殖、移行的信号，因此通过赤道区向晶状体后极部运动，LEC在后极部堆积形成PSC。王柏川等［17］研究发现Dex可以减少bFGF和TGFβ受体的表达，即可抑制增殖和分化，结合本实验结果，可以看出，Dex对LEC的分化有直接和间接的抑制作用，这种分化抑制可能在PSO形成中起主要作用，能较好地说明PSO的形成过程，而Dex对细胞的增殖最终是促进还是抑制作用，还需要进一步的探讨。
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