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3讨论
RPE细胞是一层特殊化的单层细胞，位于神经视网膜与脉络膜之间。其主要功能除了吞噬感光细胞外节段、代谢视紫红质、参与构成血—视网膜屏障、合成黑色素及细胞外基质成分、调节离子及代谢物质转运之外，还具有表达、分泌多种细胞因子、生长因子的功能。研究发现，RPE可表达：1）炎性细胞因子：TNF，IL1，IL6，IL8，TGFβ，MCP1等；2）由白细胞产生能激活视网膜细胞的细胞因子：IFNγ，IL12，IL4，IL10等；3）由视网膜细胞产生的生长因子：PDGF，FGF，VEGF，HGF，CTGF，IGF，EGF，PDGF，angiopoietin等［811］。胡诞宁等［12］发现人RPE细胞可分泌bFGF，TGFβ2和HGF，RPE；脉络膜黑素细胞与成纤维细胞均具有上述生长因子受体。提示RPE很有可能参与组成视网膜信号网络，作为视网膜信号向脉络膜、巩膜传递的中间环节，在包括近视眼在内的多种眼部疾病的发生、发展中起着重要的作用。大量临床研究证实，阿托品和哌仑西平能有效延缓儿童近视的发展［4,5］,不仅能有效抑制功能性近视的发展［13］，而且对高度近视也有控制作用［14］。由于阿托品为非特异性M受体拮抗剂，其本身并无生物学活性，表现出的效应为取消M受体激动剂的作用所致。因此，可以认为，视网膜、脉络膜组织中内源性Ach为致近视发生的有意义的信号分子。
脊椎动物和人类视网膜内存在胆碱能无长突细胞，脉络膜中存在大量的睫状后短神经分支，该神经为胆碱能自主神经纤维，能产生神经递质Ach；RPE细胞表面存在多种亚型的M受体［1517］，这为RPE细胞Ach的来源和其作用位点提供了理论依据。RPE细胞是一类具有自分泌功能的神经上皮，Narayan等［17］发现M受体激动剂和拮抗剂可影响RPE细胞分泌内皮素，提示胆碱能药物可改变RPE细胞的分泌活性。我们通过培养D407细胞，加以Ach拟似药卡巴胆碱进行干预，观察其对细胞自分泌TGFβ2的影响，分析其时效及量效关系，发现随孵育时间延长，108 ～104mol/L卡巴胆碱刺激D407细胞自分泌TGFβ2的水平逐渐升高，孵育24h效应达高峰；同一时间点卡巴胆碱随孵育浓度的增加，D407细胞自分泌TGFβ2的水平逐渐升高，卡巴胆碱浓度为106mol/L时效应达高峰。同时发现卡巴胆碱孵育24h，随孵育浓度升高，细胞内TGFβ2蛋白质的表达水平逐渐上升，卡巴胆碱浓度为107mol/L时效应达高峰，孵育浓度继续升高时细胞内TGFβ2蛋白质的表达水平无明显增高。研究结果证实，卡巴胆碱可促进RPE细胞合成并分泌TGFβ2，推测胆碱能神经递质可能通过调节RPE细胞的自分泌功能，参与对视网膜脉络膜巩膜信号传递通路的调控。
研究证实，阿托品对近视的治疗既不是通过纯粹的“调节”机制［6］，亦非作用于视网膜无长突细胞［7］。进而推测阿托品可能通过作用于脉络膜、RPE细胞或巩膜上的M受体发挥抑制眼轴增长的作用。结合RPE的自分泌特性，我们推测，RPE可能为视网膜外产生近视相关信使的位点之一，阿托品可通过作用于RPE，拮抗内源性Ach对改变其细胞因子或生长因子的分泌，从而起到抑制近视发展的作用。由于人类眼球来源困难，且不同捐赠个体之间可能存在生理功能的差异，本研究采用D407细胞作为研究对象。D407细胞是永生化视网膜色素上皮细胞株，多次传代后仍可保留分化功能［18］，是进行视网膜色素上皮的体外研究的理想材料。本研究中观察到D407细胞自分泌TGFβ2的水平明显低于胡诞宁等［12］的研究结果，考虑系细胞株多次传代后，部分生理功能发生衰减及实验条件、试剂等存在差异所致。
通过研究卡巴胆碱对RPE细胞表达及分泌细胞因子及生长因子的影响，可望确立视网膜色素上皮细胞在视网膜脉络膜巩膜信号传递通路中的地位，为阐明包括近视眼在内的多种眼部疾病的发病机制以及相应的治疗机理提供实验基础，但仍需进一步体内试验加以证实。
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