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2结果
2.1眼压变化
正常对照组8眼，模型组21只对侧未处理眼和21只模型眼在造模前平均眼压为13.1±2.5mmHg。模型组前房注入复方卡波姆溶液后约3h眼压升高大于22mmHg；3～5d达高峰平均值为40.6±1.8mmHg，并一直持续在高水平（37.2±2.1mmHg）3wk以上。模型组与对照组之间眼压有显著差异（P<0.05,图1)。
2.2 GAP43表达
我们以各组单位面积中阳性反应产物灰度值的均数作组间对比。正常对照组的双眼及模型组中未造模型的右眼的视网膜内丛状层均可观察到GAP43免疫反应产物。可在内丛状层观察到清晰的3条阳性显色带，分别位于靠近视网膜神经节细胞、内核层内侧和介于两者之间的位置，其中中间条带显色较另两条淡（图2A）。正常对照组的双眼与模型组的对侧眼（未造模眼）间阳性产物的密度没有明显区别。在模型眼中，高眼压7d时内丛状层GAP43阳性显色带较对照组密度显著加深(P<0.05)，而且在神经节细胞层和神经纤维层有大量团块状及片状的阳性染色(图2B）；高眼压14d时神经节细胞及神经纤维层的阳性染色较7d组减少有所减少，而内丛状层变化不大（图2C）；21d时神经纤维层未见阳性反应产物，内丛状层的免疫组织化学染色强度也基本接近对照组水平（P>0.05，图2D）。另外，模型组中在色素颗粒层外侧的脉络膜层可见较多念珠状的阳性神经纤维条索，在7d组最多。免疫组化的阴性对照染色结果表明，空白对照和用正常小鼠血清代替一抗的染色均无阳性反应结果。各组灰度值比较的统计分析见图3。
3讨论
我们用pH=4.0的复方卡波姆液0.15～0.20mL一次性兔眼前房注射，成功地制作了慢性高眼压模型。已知卡波姆的水溶液在pH>4时会形成凝胶状，并且随pH值升高，其黏稠性增加[8]。将其注入前房后，由于房水的pH值在7左右，使卡波姆从溶液状态变成凝胶状，阻塞房角和小梁网，妨碍房水的排出，以达到缓慢升高眼压的目的。另外，我们在配制复方卡波姆溶液时，加入了地塞米松以增加眼压升高的幅度及延长眼压升高的时间，减轻眼部炎性反应。另外应用卡波姆诱导青光眼模型时，我们的经验是选择体质量>2.5kg 的家兔，以防止因兔的体质量较小而角膜较薄，在中、高等眼压下引起角膜扩张；此外因小体质量兔的眼球较小，抽取0.1mL房水后前房所剩房水较少而不能及时缓冲卡波姆的pH值，且易引起兔眼结膜充血、角膜水肿、前房渗出等炎性反应。我们发现，前房注入1次复方卡波姆溶液0.15～0.2mL，能维持眼压高于22mmHg达3wk以上。模型眼前房内注入复方卡波姆溶液约3h后眼压即超过22mmHg，实验期间模型眼的眼压为37.2±2.1mmHg，而对照眼为13.1±2.5mmHg，二者有显著性差异 (P<0.05)，这与徐岩等[7]用复方卡波姆制慢性高眼压模型的观察结果相似。按照眼压升高大于22mmHg，并能持续1wk为慢性高眼压动物模型的标准，21只模型眼均为成功的慢性高眼压模型。因此，从升高眼压的角度可以认为前房内注入复方卡波姆溶液是一种较理想的制作慢性高眼压动物模型的方法[9]。
Kapfhammer等[10]发现，在视网膜发育早期，主要是视神经节细胞胞体和轴突中表达GAP43；而在发育后期，则主要集中在内丛状层，至动物成熟后仍有表达。大鼠眼缺血再灌注损伤[11]及黑暗条件下光照损伤实验中[12]均发现视网膜GAP43表达在特定时间段有上调，提示GAP43参与促进视神经修复和再生。在本实验中，实验性慢性高眼压对眼底视网膜及视神经会不可避免的造成损伤，对GAP43在视网膜的表达也有影响。我们发现：在高眼压7d时GAP43表达明显增多，不但在视网膜内丛状层有清晰且浓密的表达，在视网膜节细胞及神经纤维层也有强烈的阳性反应产物；14d时在节细胞层的这种阳性表达则减少；21d时GAP43的表达较7，14d明显下降，表现在视网膜节细胞层不能观察到阳性反应，而且内丛状层的阳性反应条带密度也较正常组稍淡，这种变化可能也与长期高眼压情况下视网膜节细胞已显著凋亡、内丛状层变薄等结构损伤有关[13,14]。Dijk等[15]在大鼠缺血再灌注损伤模型实验中观察到，生长相关蛋白在视网膜中表达有暂时性增高，12～24h达高峰，之后有所下降，到2wk后回到正常水平[11]。我们所观察到的GAP43的变化趋势与此有相似性。神经系统发育成熟后，GAP43除了在大脑特定区域仍然有高水平表达之外，在视网膜中也有表达，这表明视网膜区域的高度可塑性。在卡波姆模型中兔视网膜各层及视神经受到损伤，引起GAP43的短暂性表达升高，这种现象可能是视神经受损情况下机体的一种自发性保护反应，是轴突可塑性的表现，参与促进受损视神经的修复和再生。
【参考文献】
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6 Schumer RA, Podos SM. The nerve of glaucoma! Arch Ophthalmol1994;112:3744
7徐岩,陈祖基,宋洁贞.复方卡波姆诱发的兔高眼压模型与其它兔高眼压模型的比较研究.中华眼科杂志 2002;38(3):172175
8罗明生,高天惠.药剂辅料大全.成都:四川科学技术出版社 1995:383386
9杨新光,于敬妮,王晓娟.兔慢性高眼压模型的眼部表现.国际眼科杂志 2007;7(4):948950
10 Kapfhammer P,Christ F, Schwab ME . The growthassociated protein GAP43 is specifically expressed in tyrosine hydroxylasepositive cells of the rat retina. Dev Brain Res1997;101(122):257264
11 Jose J, CostaL,Goldstein J.Expression of GAP43 in the retina of rats following protracted illumination. Brain Res2001;900:332336
12 Buchi ER. Cell death in the rat retina after a pressure2 induced ischemia2 reperfusion insult : An electron micropic study. I. Ganglion cell and inner nuclear layer. Exp Eye Res1992;55:605609
13贾莉君,蒋幼芹,吴振中.前房连续注射1%甲基纤维素建立兔眼慢性高眼压模型.眼科新进展 1994;14:12
14 Benowitz LI, Routtenberg A. GAP43: an intrinsic determinant of neuronal development and plasticity. Trends Neurosci1997;20:8491
15 Dijk F, Arthur AB. GAP43 expression is upregulated in retinal ganglion cells after ischemia/reperfusioninduced damage. Exp Eye Res2007;84:858867 上一页 [1] [2] |
