|
2结果
Western blot显示，在正常大鼠视网膜中检测到了pp38 MAPK, p38MAPK和βactin蛋白的表达，其中p38 MAPK和βactin有较高的表达水平，而pp38 MAPK仅有微弱的表达（图1）. 作为内参照的βactin在正常海马组织和缺血再灌注后不同时间点的视网膜中的表达水平相当，表明在实验中所加的蛋白量基本一致. p38 MAPK在缺血再灌注组各时间点的视网膜内的表达保持相对恒定，与正常对照组相比差异无统计学意义（P>0.05）. pp38 MAPK的表达水平在再灌注后2 h时有轻度增加，但与正常对照组相比无显著差异. 其表达水平在再灌注12 h时明显升高，24 h时达到高峰，72 h时仍维持较高的表达水平，与正常对照组相比有统计学差异（P<0.01），分别是其在正常组海马组织中表达水平的3.9, 5.8和3.4倍（图1, 2）.
图1正常对照组（C）和缺血再灌注后不同时间点大鼠视网膜内pp38 MAPK，p38 MAPK和βactin蛋白的表达（略）
bP<0.01 vs正常对照.
图2正常对照组和缺血再灌注后不同时间点大鼠视网膜内pp38 MAPK和p38 MAPK蛋白的相对表达水平（略）
3讨论
视网膜缺血再灌注损伤是眼科临床很常见的病理生理过程. 由于供应视网膜血液的中央动脉为终末动脉，因此视网膜缺血及循环障碍，会导致视网膜严重损伤. 以往观点认为，恢复血液再灌注是挽救视网膜缺血的重要途径. 但近年的研究表明，视网膜在经历一定时间（60 ~ 90 min）的缺血后其功能并无变化，但是在再灌注后却出现明显的功能障碍，甚至出现不可逆的损伤，这就是视网膜的缺血再灌注损伤. 大量的研究表明，视网膜缺血再灌注损伤的发病机制较为复杂，是多种因素综合作用的结果，如氧自由基的损伤、微血管的损伤、白细胞的作用和钙超载等，但是有关的分子机制尚不清楚［3］.
MAPK在许多生长因子、细胞因子和受体激活早期信号转导事件中起关键作用. 在受到刺激后，MAPK的苏氨酸和酪氨酸残基被磷酸化，激活它们内在的激酶活性，启动一系列的细胞内信号通路. p38 MAPK是MAPK家族的主要成员之一，参与了神经细胞的分化、存活等生理过程. 以往的研究还表明p38 MAPK与包括脑缺血、缺氧等多因素所导致的神经细胞损伤有密切关系［4］，但是p38 MAPK的激活在视网膜缺血再灌注损伤中的作用目前还存在争论. 本实验中，我们观察到缺血再灌注大鼠视网膜内p38 MAPK的表达在各时间点没有变化，但是pp38 MAPK的表达却在再灌注后12 h明显升高，24 h达到最高水平，72 h时仍然有很高的水平. 上述结果表明在缺血再灌注损伤后，视网膜组织内的p38 MAPK被激活，表现为磷酸化水平增高，提示p38 MAPK的活化在视网膜的缺血再灌注损伤中可能发挥着作用.
研究表明，视网膜在缺血再灌注损伤后，出现萎缩，视网膜细胞明显减少. 视网膜细胞的减少主要是在内五层，这五层主要为神经节细胞层和内核层，其中包含的主要细胞为神经节细胞、双极细胞、无长突细胞和水平细胞［5］. 既往研究报道，p38 MAPK主要表达于视网膜的无长突细胞和节细胞［6］. p38 MAPK的磷酸化在上述两种细胞的增殖和分化过程中具有重要作用. 那么，在视网膜缺血在灌注损伤后，p38 MAPK通路的激活发挥着何种作用，尚不清楚. 有研究提示，p38 MAPK抑制剂SB203580能够有效抑制视神经损伤所导致的视网膜节细胞的凋亡［7］. 还有研究表明，钙通道阻滞剂尼莫地平对缺血再灌注损伤的视网膜具有保护作用，而且该保护作用可通过抑制p38 MAPK mRNA的表达来实现［8］.结合p38 MAPK主要表达的细胞类型，我们推测视网膜缺血再灌注损伤后p38 MAPK通路的激活可能与视网膜的无长突细胞和节细胞的损伤有密切的关系，进一步的研究正在进行中.
【参考文献】
［1］ Osborne NN, Casson RJ, Wood JP, et al. Retinal ischemia: mechanisms of damage and potential therapeutic strategies ［J］. Prog Retin Eye Res, 2004, 23(1): 91-147.
［2］ 丁建光，蒋德咏. 视网膜缺血再灌注损伤的保护 ［J］. 国际眼科杂志, 2005, 5(5):1010-1015.
［3］ Ghiardi GJ, Gidday JM, Roth S. The purine nucleoside adenosine in retinal ischemiareperfusion injury ［J］. Vision Res, 1999, 39(15): 2519-2535.
［4］ Irving EA, Barone FC, Reith AD, et al. Differential activation of MAPK/ERK and p38/MAPK in neurons and glia following focal cerebral ischemia in the rat ［J］. Mol Brain Res, 2000, 77(1): 65-75.
［5］ Dijk F, van Leeuwen S, Kamphuis W. Differential effects of ischemia/reperfusion on amacrine cell subtypespecific transcript levels in the rat retina ［J］. Brain Res, 2004, 1026(2): 194-204.
［6］ Campos CB, Bedard PA, Linden R. Activation of p38 mitogenactivated protein kinase during normal mitosis in the developing retina ［J］. Neuroscience, 2002, 112(3): 583-591.
［7］ Kikuchi M, Tenneti L, Lipton SA. Role of p38 mitogenactivated protein kinase in axotomyinduced apoptosis of rat retinal ganglion cells ［J］. J Neurosci, 2000, 20(13): 5037-5044.
［8］ 傅映晖, 许军, 张劲松. 大鼠视网膜缺血再灌注损伤后P38丝裂原活化蛋白激酶和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶表达的变化及尼莫地平对二者的影响 ［J］. 中华眼科杂志，2006, 42(5): 435-442. 上一页 [1] [2] |
