2 结果

2 ． 1 H a z e 分级评估结果兔E p i — L A S I K 术后各组不同时间点h a z e 分级评
估情况见表2 。结果显示， 术后0 ． 5 个月和1 个月， N C组、T e t 组和F M L 组3 组问总体比较差异均有统计学意义( P ： 0 ． 0 0 3 ， 0 ． 0 0 2 ) 。其中T e t 组和F M L 组的
h a z e 等级均明显低于N C 组， 术后0 ． 5 个月和1 个月，T e t 组与N C 组相比差异均有统计学意义( P = 0 ． 0 0 2 ，0 ． 0 0 3 ) ；F M L 组与N C 组相比， 差异有统计学意义
( P = 0 ． 0 0 7 ， 0 ． 0 1 2 ) ；T e t 组和F M L 组比较差异无统计学意义( P > 0 ． 0 5 ) 。术后2 个月N C 组、T e t 组和F M L组3 组间总体比较差异无统计学意义( P > 0 ． 0 5 ) 。

2 ． 2 R T — P C R 结果R T — P C R 法在各组样本中均检测到T G F - 13 ：m R N A
的表达( 图1 ) 。各组均表现出先升高后降低的特点( 表3 ) 。术后各时间点N C 组分别与F M L 组和T e t 组比较， 差异均有统计学意义( P < 0 ． 0 1 ) ；T e t 组和F M L组间比较， 差异均无统计学意义( P > 0 ． 0 1 ) 。

2 ． 3 免疫组织化学结果免疫组织化学法检测到各组术后均有T G F — p ： 的表达( 表4 ， 图2 ) 。术后各时间点组间比较， F M L 组和T e t 组的表达水平均低于N C 组， 差异有统计学意义( P< 0 ． 0 1 ) ， 但F M L 组和T e t 组之间的表达水平差异无统计学意义( P > 0 ． 0 I ) ；组内比较， 各组均表现出先升高后降低的特点。

图2 免疫组织化学结果( D A B × 4 0 0 ) A ：N C 组角膜上皮下浅基质层切削区附近和深基质层均见T G F — B 2 的强阳性表达( 红箭) B ：T e t 组浅基质层有T G F 。B 2 的散在阳性表达， 强度弱于N C 组( 红箭) C ：F M L 组见浅基质层有T G F — p ： 的散在阳性表达， 但强度较N C 组弱( 红箭)
F i g ． 2 I m m u n o h i s t o c h e m i s t r y f o r T G F — p 2 i n r a b b i t c o r n e a l s t r o m a ( D A B × 4 0 0 ) A ： T h e s t r o n g e x p r e s s i o n o f T G F ’ B 2 d i f f u s e fr o m t h e s u h ’ e p i t h e l i u n l
a b l a t i o n z o n e t o t h e p o s t e r i o r s t r o m a i n N C g r o u p ( r e d a r r o w h e a d ) B ： T h e w e a k e r e x p r e s s i o n o f T G F 􀂷 p 2 d i f u s e i n a n t e r i o r s t r o m a i n T e t g r o u p ( r e d
a r r o w h e a d ) C ：P o s i t i v e s t a i n i n g o n l y i s s h o w e d i n a n t e r i o r s t r o m a i n fl u o r o m e t h a l o n e g r o u p ( r e d a r r o w h e a d )

3 讨论

H a z e 是准分子激光角膜表面切削术， 如准分子激光角膜切削术( p h o t o r e f r a c t i v e k e r a t e e t o m y ， P R K ) 、准分子激光上皮瓣下角膜磨镶术( L A S E K ) 以及E p i - L A S I K等术后出现的主要并发症。而不同手术方式h a z e 的发生率不同。其中， E p i — L A S I K 手术由于保留较完整的基底膜， 术后角膜创伤愈合反应轻， 其h a z e 发生率
较P R K 、L A S E K 更少” ’ ” ⋯ 0， 但仍未完全解决术后h a z e问题。术后常规使用F M L 存在诱发皮质类固醇性高眼压的风险， 且在临床随访病例中并不罕见。因此， 进一步探索更为安全、有效的抗h a z e 药物具有重要现实意义。前期研究报道了T e t 能有效抑制离体兔角膜基质细胞的增生⋯ 一。0。针对T e t 的抗h a z e 形成作用进行活体组织病理学观察显示：T e t 通过抑制基质层角膜细胞增生、降低Ⅲ 型胶原表达， 能有效抑制兔E p i — L A S I K术后h a z e 形成， 其疗效与F M L 相似¨ 。。在此基础上，我们对T e t 抑制兔E p i — L A S I K 术后h a z e 形成的机制进行初步探讨。H a z e 的形成涉及角膜细胞激活为成纤维细胞、成
纤维细胞移行至伤口处、成纤维细胞分化为肌成纤维细胞， 以及细胞外基质( e x t r a c e l l u l a r m a t r i x ， E C M ) 成分的沉积与重塑。正常兔角膜组织中可检测到T G F — p ：
基因表达¨ J。T G F — B 在启动这一复杂的细胞一基质一细胞因子相互作用中起主要作用。但T G F — p 对不同类型的细胞， 其生物学效应不同：T G F — p 可抑制上皮细胞的增生， 而对由表皮生长因子( E G F ) 引起的上皮增生， 其抑制作用很弱川“。因为正常上皮细胞百『表达
E G F ， 因而T G F 。13 不会对上皮细胞的正常生理活性造成明显影响， 通过角膜组织切片观察见上皮层结构完整也证实了这一点；T G F — B 对基质层角膜细胞的生物学作用主要表现为使角膜细胞活化为成纤维细胞， 并诱导成纤维细胞表达平滑肌肌动蛋白( Ot - S M A ) ， 从而
转化为肌成纤维细胞” 。。。。而成纤维细胞和肌成纤维细胞是角膜创伤愈合反应过程中最重要的两种细胞， 是兔E p i — L A S I K 术后浅基质层新合成的E C M 成分的来源细胞， 这两种细胞生成增加必然导致新合成的E C M 量随之增多。而肌成纤维细胞因含有使其具备收缩能力的关键成分仪． S M A， 能向基质层的胶原施加力量使h a z e 的程度加重。此外， T G F — B 还能在转录和翻译水平对其促纤维化作用的下游调控因子— — 结缔组织生长因子
( c o n n e c t i v e t i s s u e g r o w t h f a c t o r ， C T G F ) 的表达进行调
控” ” 。7 1。T G F — p 的全部3 个亚型p ， 、p ： 、13 ，均能诱导人角膜成纤维细胞的C T G F 在m R N A 和蛋白水平高表达， 并且呈剂量依赖性。而这3 个亚型中又以T G F — p ：
作用最强， 显著高于T G F — p ． 的作用Ⅲ 。。哺乳动物眼前节主要表达T G F — p ，和T G F — p ： ， 故本研究选择h a z e形成过程中的关键性调控因子T G F ． B ：作为检测指标。
本实验采用R T ． P C R 和免疫组织化学法对T G F —B ， 在m R N A 和蛋白水平的表达强度与表达部位进行了检测， 结果发现， T G F 一13 ，在兔E p i — L A S I K 术后各组表达强度有所不同， 并呈现出先升高后降低的特点， 与活体上观察到的haze形成的时相特点相一致；在角膜组织上皮和基质层均可检测到TGF—B 的阳性表达，但以基质层表达为主，与Ⅲ 型胶原的变化相一致 。统计结果显示，Tet组和FML组的haze分级水平与TGF—p：的表达水平显著低于NC组，但Tet组和FML 2组之间差异无统计学意义。这说明Tet和FML均能通过下调TGF-8，的表达来抑制兔Epi—LASIK术后haze的形成，并且二者的作用相似。综上所述，Tet可能是通过下调TGF．p：的表达，来
减少基质层细胞和ECM 的生成，从而发挥其抗haze效应的。并且通过与FML比较，发现二者调控兔Epi—LASIK术后haze形成的作用强度相似，这说明Tet具备一定的眼科临床应用价值。但Tet在眼局部使用的不良反应和药代动力学特点尚待明确。

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