王祯莲   屠理理

温州医学院眼视光医院   325027

目的：眼睑发育缺陷可能导致角膜发育异常和先天性眼表疾病。目前，已经明确了G蛋白偶联受体48(G-protein Coupled Receptor 48，GPR48)基因敲除小鼠有出生时眼睑融合不全（eye-open at birth，EOB）表型，并且发现Gpr48+/+和Gpr48-/-上皮细胞中EGFR磷酸化水平有差异。本实验深入探讨Gpr48通过EGFR信号转导通路介导眼睑上皮细胞的增殖和迁移。

方法：利用EGFR激酶抑制剂AG1478，分析Gpr48调节的EGFR下游通路。利用ADAM抑制剂GM6001，分析Gpr48对EGFR反式激活是ADAM依赖性的。利用western blot方法，检测Gpr48诱导分泌的EGFR ligand在细胞培养上清中的表达。利用rescue的方法，研究EGFR ligand对Gpr48-/-细胞中EGFR磷酸化的激活。利用免疫剔除（immuno-depletion）法，分析在Gpr48反式激活EGFR中发挥作用的EGFR ligand。利用划痕增殖实验，确定Gpr48通过调控EGFR信号转导通路介导细胞的增殖和迁移。

结果：本实验从信号转导的角度，以Gpr48为切入点，通过ADAM依赖性EGF样配体HB-EGF/TGFα自分泌激活EGFR信号转导通路，诱导ERK1/2和STAT3的活化，调控上皮细胞的增殖和迁移。

结论：在眼睑发育过程中，GPR48基因通过激活EGFR信号转导通路影响上皮细胞的增殖和迁移，从而导致眼睑发育不全，出生时眼睑闭合不全（EOB）。