|
2 结果
2.1 视网膜组织学变化
视神经夹伤后4，7，14d RGCs数目不断减少，实验组视网膜RGCs排列较稀疏，形态尚正常，细胞间可见较多Müller纤维，可见空泡变性，神经纤维层逐渐变薄。对照组视网膜RGCs大小不等，轮廓不规则排列明显稀疏，大量RGCs核固缩凋亡，崩解，有空泡变性，神经纤维层明显变薄。各时间点内实验组RGCs数均高于对照组，差异有统计学意义[(19.35±1.70 vs11.88±1.56;16.76±1.62 vs 7.53±1.63;14.54±1.52 vs 4.13±1.67/HP (×400，P<0.01)，图1A～F]。
2.2 免疫组织化学染色结果
损伤后两组均有MBP阳性表达，盐水组表现为强阳性;EGb761组MBP表达呈下降趋势，14d表达呈弱阳性;BSS组表达也随时间有所减弱，但14d时表达仍明显;7，14d EGb761组MBP蛋白免疫组化阳性率(%)均低于盐水组，差异均有统计学意义[56.18±2.11 vs74.56±3.37;44.37±2.98 vs 79.70±1.90/HP(×400)，P<0.01，图2A～D]。
3 讨论
缺血、高眼压和眼外伤等多种原因造成的视神经损伤，其病理基础是RGCs进行性死亡和视神经纤维的丢失，导致视功能发生不可逆性改变[3]。采用视神经夹挫伤模型损伤程度一致，可部分定量，重复性较好。导致RGCs凋亡的机制很多，主要包括兴奋性谷氨酸中毒、一氧化氮神经毒性、活性氧自由基、逆向轴浆运输障碍导致靶源性神经营养缺失等。目前寻找神经修复与再生的有效手段已成为现代神经生物领域的热点。银杏叶提取物EGb761对中枢神经损伤的保护及神经功能恢复的效果已得到认可，但具体机制仍不明确。众多研究表明，EGb761具有抗氧化、抗缺血、保护线粒体、 抑制一氧化氮合酶、抑制谷氨酸毒性以及抑制血小板活化因子等多种作用[4]。EGb761在神经元活化过程中，可能通过阻断SnkSPAR途径达到保护树突棘内骨架蛋白的作用，维持了树突棘的稳定性，从而发挥其神经保护作用[5]。MBP约占髓鞘蛋白质的30%，是目前所知构成中枢神经系统髓鞘的唯一结构蛋白。生理状态下MBP的含量很低，只有在神经组织变性发生脱髓鞘改变时才会显著升高[6]。MBP是视神经损伤后较为合适的生化标记物，可全面反映神经元、胶质细胞、神经髓鞘膜的损害程度，可为判断视神经受损程度提供定量信息，并对判断预后有指导意义。我们将EGb761和BSS分别行球后注射，观察到7d和14d实验组RGCs数目无明显变化，MBP免疫组织化学表达稳定，而对照组RGCs数目减少，MBP表达持续呈强阳性，二者差异有统计学意义。已知视神经机械性损伤后,可导致NO过量和过氧化损伤，此外尚有神经营养因子剥夺、钙超载、兴奋性氨基酸过量等因素参与，受损RGC轴突及其胞体变性坏死，继而发生凋亡，导致存活RGC的数量减少。轴突受损越严重，髓鞘脱落越多，MBP表达越明显，存活RGCs数目越少。通过EGb761干预后，MBP表达稳定，RGCs存活数目显著增加，而对照组MBP表达仍明显，RGCs数目减少。推测EGb761通过改善受损神经的微循环，捕捉和清除自由基，对抗谷氨酸的损伤，进而减轻轴突损伤，恢复轴浆流，保护细胞骨架的完整，从而部分避免RGCs的凋亡。
总之，通过球后注射EGb761，观察到EGb761能够增加视网膜RGC的存活数量，抑制MBP的表达，从髓鞘变化的角度探讨了EGb761在阻止轴突变性，提高RGCs存活过程中的作用。随着中药组分提取技术和对视神经损伤病因病理研究的发展，EGb761将会更科学地应用于视神经损伤的临床治疗中。
【参考文献】
1 Schober MS, Chidlow G, Wood JP, et al. Bioenergeticbase neuroprotection and glaucoma. Clin Exp Ophthalmol 2008;36(4):377385
2 Chandrasekaran K, Mehrabian Z, Spinnewyn B, et al. Neuroprotective effects of bilobaliede, a component of Ginkgo biloba extract (EGb 761) in global brain ischemia and in excitotocicityinduced neuronal death. Pharmacop sychiarty 2003;36(1):9498
3 马科,张海娟,李月华，等.银杏叶提取物对视网膜神经节细胞保护作用的实验研究.眼科 2007;16(6)：418420
4 Ji L, Yin XX, Wu ZM, et al. Ginkgo biloba extract prevents glucoseinduced accumulation of ECM in rat mesangial cells. Phytother Res 2009;23(4):477485
5 吴兰香,孙长凯.银杏叶提取物神经保护作用中SnkSPAR途径机制探讨.神经解剖学杂志 2007;23(2):199204
6 Harauz G, Musse AA. A tale of two citrullinesstructural and functional aspects of myelin basic protein deimination in health and disease.Neurochem Res 2007;32(2):137158 上一页 [1] [2] |
