杨瑞华 陈景元 刘学东 邓中荣 刘秀红
摘要 目的：探讨微波对体外培养的猪视网膜神经节细胞的脂质过氧化损伤作用及耐受剂量，可为进一步研究微波的眼底损伤机理及其防护提供一定的实验依据。方法：体外培养猪视网膜神经节细胞，2450MHz连续波以不同强度和时间进行辐照，然后继续培养48小时，测定超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)含量。结果：微波辐照后，细胞MDA含量明显增高，SOD降低，经过48小时再培养，MDA含量有所恢复，SOD含量增高。结论是：微波可引起视网膜神经节细胞脂质过氧化损伤，在一定剂量范围内为可逆性损伤。
关键词 微波 视网膜神经节细胞 脂质过氧化
Lipid peroxide damage in retinal ganglion cells induced by microwave
Yang Ruihua,Chen Jingyuan,Liu Xuedong,et al.
Department of Military Hygiene,the Fourth Military Medical University,Xi'an 710032
The determination of lipid peroxide damage in the primary cultured pig retinal ganglion cells induced by microwave can provide some experience on the effect of microwave and the protection from its damage. Retinal ganglion cells were cultured in vitro and exposed to different intensities or time of microwave,and cultured for another 48 hours.The content of superoxide dismutase (SOD) and malondialdehyde (MDA) was detected.Results showed that the content of MDA was increased and SOD decreased after radiation.After 48 hours in culture,the content of MDA recovered, and SOD increased.It is concluded that microwave induced the lipid peroxide damage in primary cultured retinal ganglion cells.These damages were recoverable in certain range of indensity or time.
Key words: microwave,retinal,ganglion cells,lipid peroxide
近年来，随着微波在工农业生产、医疗卫生、通讯、家用电器以及军事等领域的广泛应用，微波的医学防护受到极大的关注，微波的损伤是多方面的，但眼睛是最敏感、重要的靶器官。多年的研究表明，微波可以对眼睛造成明显损害［1，2］。研究微波对体外培养的视网膜神经节细胞的损伤及其作用机理，可为进一步研究微波的眼底损伤的机理及其防护提供一定的实验依据。
1 材料和方法
1.1 材料
眼球来源于西安市肉联厂；木瓜蛋白酶(中科院上海生化所东风生化技术公司)；牛血清白蛋白(中国医学科学院血液学研究所)；DL-半胱氨酸，DMEM培养基(Gibco公司)；小牛血清(杭州四季青生物工程公司)；YJ-875医用净化工作台(苏州净化仪器厂)；TE-HER式数字式CO2培养器(日本平泽制造厂)；微波理疗机(上海微波医疗仪器厂)；其它试剂均为分析纯。
1.2 细胞培养
屠宰场的猪被宰杀后立即摘取眼球，剪除周围结缔组织，清水充分洗涤，200U/ml的庆大霉素浸泡20min，移入超净工作台，沿眼球赤道部环形切开，去除晶体及玻璃体，剥离并剪碎视网膜，加入含牛血清白蛋白(0.2g/L)、DL-半胱氨酸(0.2g/L)、木瓜蛋白酶(26U/ml)的Hanks液，于37℃消化40min［6］。离心洗涤，置于含10%小牛血清的DMEM培养液中，在37℃、5%CO2孵箱培养。
1.3 辐照条件
频率2450MHz连续波辐照，室温19～20℃，相对湿度40%。细胞分为4组，分别为10mW/cm2(30min，Ⅰ组)，10mW/cm2(60min，Ⅱ组)，30mW/cm2(30min，Ⅲ组)，30mW/cm2(60min，Ⅳ组)。
1.4 指标测定
1.4.1 细胞形态观察
光镜下观察细胞。
1.4.2 SOD及MDA测定
收集细胞，PBS漂洗2～3次，调整细胞浓度为1×106/ml，超声粉碎，取100μl进行SOD：羟胺法和MDA［7］：改良硫代巴比妥酸荧光法测定［8］。
2 结果
2.1 微波辐照及再培养对细胞形态的影响
细胞培养3～5天后，细胞贴壁，体积小，圆形，分散存在，部分细胞有轴突伸展(照片1)。微波辐照后，Ⅰ组细胞发生聚集，仍可见轴突，细胞边界清楚(照片2)；Ⅱ组细胞聚集成团，少数细胞散在，轴突消失，边缘较模糊(照片3)，偶见“环状”细胞出现(照片4)；Ⅲ组细胞与Ⅱ组相似，散在细胞较多；Ⅳ组细胞多数边界模糊，部分细胞漂浮，可见细胞碎片(照片5)。辐照后细胞继续培养48小时后，Ⅰ组细胞大部分散在，少量聚集(照片6)，Ⅱ组细胞仍聚集成团，但细胞亮，边缘清楚，Ⅲ组变化不明显，Ⅳ组细胞减少，杂质多。
1 正常RGC形态(×250)
2 10mW/cm2(30min)辐照后细胞形态(×250)
3 10mW/cm2(60min)辐照后细胞形态(×250)
4 10mW/cm2(60min)辐照后凋亡样细胞(×400)
5 30mW/cm2(60min)辐照后细胞破坏较重(×250)
6 辐照后再培养48h的细胞形态(×250)
附图 微波辐照及再培养对细胞形态的影响
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