摘要 目的构建小鼠TGFBI基因的真核表达载体,为研究角膜营养不良的发病机制奠定基础。方法 提取 BALB/cBy小鼠正常角膜组织总RNA,经反转录一PCR合成TGFBI cDNA,克隆入真核表达载体pcDNA3.1并测序验证。用不同剂量重组质粒peDNA3.1一TGFBI转染NIH3T3细胞,通过SYBR荧光实时定量PCR和Western blot检测TGFBI在细胞中的表达。结果测序结果显示扩增到的TGFBI cDNA 以正确序列和方式插入载体,实时定量PCR 和Westernblot结果显示TGFBI在NIH3T3细胞中表达增强。 结论成功构建了小鼠TGFBI基因真核表达载体,并在细胞中进行表达,为进一步研究TGFBI在角膜内的生理、病理功能奠定基础。
查看全文 |