【摘要】 目的：观察中药益视汤对脾气虚证兔视网膜脱离(retinal detachment,RD)自动复位后视网膜组织结构恢复的影响。方法：将健康成年新西兰灰兔26只随机分为脾气虚型RD自动复位组(A组)、益视汤治疗组(B组)及空白对照组(C组)，采用耗气破气加饥饱失常法建立脾气虚证动物模型，在显微镜下行视网膜下注射透明质酸钠术建立视网膜脱离自动复位动物模型，用光学显微镜分别观察比较术后10，20，30d视网膜组织结构的变化。结果：B组较A组兔视网膜组织结构紊乱明显改善，细胞水肿变性明显减轻。结论：益视汤能减轻脾气虚证对视网膜脱离自动复位后各层组织细胞的不良影响。
【关键词】 益视汤;脾气虚证;视网膜脱离;视网膜组织形态
Affection of the chinese herbal drug decoction of yishi on the spleenqi deficiency models reconstruction of reattached retina
YanChun Zhang, HuiFang Wang, XinGuang Yang, SaiLin Zhu, ChunChao Bi, YaFu Li
Foundation item:Science and Technology Project Xian, China (No.GG05138)
Department of Ophthalmology;Department of Pathology; Clinical laboratory, the Fourth Hospital of Xian, Xian 710004, Shaanxi Province, China; Xian Gucheng Eye Hospital, Xian 710014, Shaanxi Province, China
Abstract
AIM: To observe the affection of the chinese herbal drug decoction of yishi on the spleenqi deficiency models reconstruction of reattached retina.
METHODS: Twentysix healthy pigment rabbits were randomly divided into experimental groups and control group. The spleenqi deficiency models were induced by exhausting and breaking the spleenqi with potent Chinese herbal drugs and starving and satisfying the rabbits abnormal. Then the rabbits eyes were operated to produce the model of retinal detachment by infusion of sodium hyaluronate between the neurosensory retina and the pigment epithelium. Observe the histomorphology of reattached retina after 10, 20, 30 postoperative days.
RESULTS: There were serious pathologic changes and a slow recovery on the retinal cells of deficiency of spleenqi group. The experimental group with chinese herbal drug decoction of yishi had an obvious improvement of the serious pathologic changes.
CONCLUSION: The chinese herbal drug decoction of yishi can relieve the negative effects on the reattached retina that the pathology of deficiency of spleenqi syndrome brings, and the curative effect has relation with administration time.
KEYWORDS: the chinese herbal drug decoction of yishi; the pathological state of deficiency of spleenqi; retinal detachment;the histomorphology of reattached retina
0引言
前面的动物实验结果已经表明脾气虚证对视网膜脱离(retinal detachment,RD)自动复位后视网膜组织结构的重建有严重的不良影响[1]，我们在前面研究的基础上采用自组中药制剂益视汤对伴有脾气虚证的视网膜脱离自动复位实验兔进行灌胃，观察益视汤对其视网膜复位后组织重建的影响作用。
1材料和方法
1.1材料 健康成年清洁级新西兰灰兔26只，2000～2500g雌雄不限，经裂隙灯、眼底镜检查眼前节及眼底均无异常，由第四军医大学动物实验中心提供，随机分为3组，A组12只为脾气虚型RD自动复位组，B组12只为灌服益视汤组，C组为空白对照组，A，B组分别在建立RD自动复位模型手术后10，20，30d分阶段处死并摘取眼球(每组兔各阶段处死4只)，C组兔在实验结束时处死取材。于实验开始后参照耗气破气加饥饱失常脾气虚证动物模型制备方式[2]按先前的方法造脾气虚动物模型，并于实验开始后22d在手术显微镜下按原方法造RD自动复位动物模型[1]。益视汤由人参、黄芪、牛膝、枸杞、茺蔚子、
图1 兔视网膜组织学表现(HE×40) A：正常兔视网膜;B：A组术后10d;C：B组术后10d;D：A组术后20d;E：治疗组术后20d;F：A组术后30d;G：B组术后30d。(略)
当归等9味药按一定比例混合，凉水浸泡30min后煎开20min，共煎2次并混合药液，80℃恒温浓缩药液制成1kg/L浓度煎剂，4℃保存备用。中药材经陕西中医学院药用植物研究室检验合格。药量按人用量的两倍进行体表面积换算为11mL/kg，RD自动复位模型制备后Ⅳ组兔每天上午经胃管灌喂益视汤煎剂直至术后10，20，30d处死取材，其它各组同时灌喂等量生理盐水。
1.2方法 在造模和恢复过程中观测兔子的精神、症状、体重、肛温、食量、大便及小便情况、活动度、舌象、死亡数等。造模后用直接检眼镜于术后每天观察眼底视网膜脱离的范围、视网膜隆起的高度、裂孔大小、自动复位时间、视网膜出血情况和玻璃体反应等情况。在预定的实验期满后，采用耳缘静脉注射过量30g/L戊巴比妥钠处死实验兔，即刻摘取眼球，右眼于多聚甲醛中固定24h后沿视神经水平面切开，再沿矢状轴经视神经鼻侧2mm处切开，取鼻下方发生过RD并已复位区域的视网膜组织，经乙醇梯度脱水，氯仿透明，浸蜡包埋，用切片机连续切成厚3μm的切片5张，分别贴于载玻片上，常规脱蜡，HE染色封固。显微镜下观察并拍照。
2结果
2.1宏观指标结果 制备脾气虚证模型过程中，造模开始后7d，A，B组实验兔全面出现纳食量减少、精神萎靡、蜷缩嗜卧、拱背、受惊时无神、软便、体质量减轻、毛色枯黄等脾气虚证一般症状体征，10d后出现耳尾色白、体温升高、舌质淡嫩、少苔。停止脾气虚造模因素后观察到该组兔软便持续存在，毛色灰白、体质量减轻、精神倦怠等脾气虚证一般症状体征持续至实验结束。B组兔经治疗后脾气虚证一般症状体征逐渐得以恢复。C组兔未见明显异常。
2.2眼部变化 手术过程中有2眼在视网膜上造孔时发生视网膜表面少量出血平铺于视网膜前，未进入玻璃体;2眼出血量较多进入玻璃体，术后1d观察所有实验眼角膜均透明、前房清亮、晶状体透明，2眼玻璃体下方少量积血呈絮状，其余玻璃体无混浊,直接检眼镜下见下方视网膜均呈灰白色隆起4～5D,范围达50%～60%,裂孔约1～2PD大小,均位于鼻下方近赤道部。视网膜前及玻璃体积血吸收较快，3～4d完全吸收。A组兔RD维持7.5±2.2d，B组兔RD维持6.7±2.2d，经方差分析两组自动复位时间均数之差异无统计学意义。
2.3视网膜变化 C组光镜下清晰可见视网膜色素上皮层、视杆与视锥层、外核层、外丛状层、内核层、内丛状层、神经节细胞层、神经纤维层等正常结构，各层细胞及组织排列整齐，层次结构清晰(图1A)。术后10d A组光镜下所有眼视网膜均复位，厚度明显增加，各层均有水肿。色素上皮细胞肥大、增生、游离，色素颗粒减少。光感受器外节结构显著紊乱、断裂缺失，内节疏松水肿，空泡变性。各层细胞均可见细胞肿胀、空泡变性，尤以双极细胞层和节细胞层明显。内、外核层细胞可见明显核固缩，外核层更严重。内外网状层结构紊乱，疏松水肿，Müller细胞框架纤维结构紊乱，神经纤维层空泡，部分神经节细胞水肿(图1B)。B组视网膜复位，色素上皮细胞未见明显增生及游离，外节及内节结构紊乱、内外核层及节细胞水肿较A组轻。视细胞内节、内核层及内丛状层空泡变性减轻，内外核层均可见核固缩现象，Müller细胞纤维支架结构局部紊乱，神经纤维层空泡及部分节细胞水肿(图1C)。术后20d：A组视网膜各层水肿较A组术后10d减轻，RPE层色素颗粒增多，个别细胞游离。光感受器结构紊乱明显，外节仍有断裂缺失，结构模糊，内节大量空泡样变性形成空洞。内外核层、网状层排列结构紊乱，尤以内核层为著，仍有较多细胞水肿、空泡样变性，核固缩较术后10d减少。神经节细胞水肿、神经纤维层空泡变性减轻(图1D)。 B组：视网膜各层结构基本清晰，RPE层正常外观，未见明显色素细胞游离。光感受器外节形态接近正常，少量空泡变性，内节结构仍有紊乱。内外核层、网状层结构仍有紊乱，细胞稍有水肿，部分细胞空泡变性，内外核层可见少量细胞核固缩。神经节细胞和神经纤维层结构基本正常，少量节细胞轻度水肿(图1E)。术后30d：A组视网膜光感受器结构疏松紊乱较前好转，内外核层、网状层仍结构紊乱，外丛状层囊样变性明显，双极细胞、神经节细胞水肿、空泡变性明显，内核层细胞肿胀减轻。Müller细胞纤维支架结构不清(图1F)。B组视网膜各层结构清晰，排列基本整齐。双极细胞、神经节细胞水肿轻微，个别细胞有空泡样变性。外丛状层囊样变性较A组好转。Müller细胞纤维支架结构清晰(图1G)。
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