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2结果
2.1 HSP70和NFκB的含量
经紫外线诱导的晶状体上皮细胞中HSP70的表达在3，12，24h用谷氨酰胺干预组均比对照组含量增加，并且随着谷氨酰胺浓度和干预时间的延长HSP70表达随之增强(表1);NFκB的表达随着谷氨酰胺剂量的增加而明显减弱，统计学分析具有显著差异(P<0.05,表1)。
2.2晶状体混浊程度分析
大鼠晶状体离体经紫外线照射后培养3h开始，大鼠晶状体逐渐开始混浊，每2h裂隙灯下观察大鼠晶状体混浊程度进展，依据Zhang等[4]对紫外线白内障进行分级：晶状体透明;+晶状体前囊混浊;++前囊膜及周边混浊; +++裂隙灯可见前皮质混浊;+++皮质混浊明显,肉眼即可见。分析结果见表1。
3讨论
白内障是世界范围内主要的致盲原因,流行病学调查表明，紫外线辐射可致晶状体混浊，氧化损伤是白内障形成的重要因素，不同类型白内障共同的细胞学基础是晶状体上皮细胞的凋亡[5]。晶状体上皮细胞凋亡导致细胞密度降低,影响了晶状体纤维生长及生长质量,上皮细胞缺损使其下的晶状体纤维渗透压平衡失去控制,使这部分晶状体纤维的透明性和完整性受损。氧化损伤导致晶状体上皮细胞凋亡的机制仍不十分清楚,有研究认为,紫外线可以使细胞氧化还原反应位点向着氧化型方面转移,致细胞暴露于氧化损伤的环境下,使其DNA分子损害,细胞膜失去转运能力,细胞膜的钙离子泵对过氧化氢极为敏感,其所引起的Ca2+内流,导致细胞凋亡。周海燕等[6]通过实验认为抗氧化剂在体外可以有效防护晶状体氧化损伤，清除活性氧，阻止细胞凋亡。热休克蛋白是一类结构高度保守的蛋白质，具有重要的生物学作用。按其分子量大小可分为HSP90,HSP70,HSP60,HSP32及小分子和大分子热休克蛋白等多个家族[7]。HSP70是其中最保守，最主要，含量最丰富的一类，在应激后生成最为显著，它作为分子伴侣参与细胞内蛋白质的折叠，装备，降解和修复过程，以维持蛋白质的自稳系统。最近的一些研究表明HSP70的表达对热休克，氧化损伤，射线，TNF,FAS/APO和酰基鞘氨醇等多种刺激诱导的凋亡有抑制作用： HSP70通过抑制线粒体细胞色素C的释放及caspase3的活化而抑制细胞凋亡，张伟英等[8]研究表明，老年性白内障晶状体中HSP70表达高于透明晶状体;Bagchi等[9]发现体外培养的小鼠LECs在氧化，高渗等刺激下表达HSP70增加;在鸡的晶状体中HSP70能与晶状体蛋白相互作用，从而保护它们免受应激损害而变性[10]。NFκB是一种普遍存在的诱导型核转录因子,静息状态下多以P50和P65二聚体与其抑制蛋白IκB相结合而存在于胞质中,呈无活性状态，当细胞受到脂多糖、细胞因子等外源性刺激后,通过信号传导引起IκB降解,导致NFκBIκB复合物解体,NFκB活化进入细胞核,在核内与靶基因的特异序列结合并启动转录发挥其调控作用。现已证实NFκB参与了许多细胞因子及炎症介质基因的转录调控,在炎症反应的细胞因子网络调节中起重要作用。NFκB活性与LPS诱导的肿瘤坏死因子α(TNFα)、细胞间黏附分子1(ICAM1)基因表达成正相关,抑制NFκB活性可降低这些因子的基因和蛋白表达。耿桂启等[3]研究显示谷氨酰胺预处理可以抑制大鼠肠缺血/再灌注后肺组织NFκB表达,而槲皮素可以部分阻止这种抑制作用,这表明Gln的抗炎作用与其诱导HSP表达进而抑制NFκB的活性、减少炎症介质产生有关。
我们通过谷氨酰胺预处理可诱导晶状体上皮细胞HSP70的表达，抑制NFκB表达，实现对晶状体上皮细胞的保护作用，其作用可能是Gln的抗炎作用与其诱导HSP表达进而抑制NFκB的活性、减少炎症介质产生有关，从而为药物预防和治疗白内障提供了实验依据，但是HSP70对NFκB的抑制作用机制仍需要进一步研究。
【参考文献】
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2张志宏,田文儒,李辉辉,等.谷氨酰胺诱导小鼠热休克蛋白70表达的研究.中国农业科学 2009;42(4):14281434
3耿桂启,黄绍强.谷氨酰胺对大鼠肠缺血/再灌注后肺组织nfκb表达的影响.复旦学报医学版2009;36(5):566573
4 Zhang F, Lofgren S, Soderberg PG. Interaction of anesthetic drugs and UVB irradiation in the anterior segment of the rat eye. Acta Ophthalmol
Scand 2007;85(7):745752
5李春丽,鲁建华,张文芳.紫外线对大鼠晶状体泛素mRNA表达水平的影响.眼外伤职业眼病杂志(附眼科手术) 2009;31(6):405407
6周海燕,鲁建华,张文芳,等.紫外线致兔晶状体上皮细胞损伤的实验研究.眼科新进展2006;26(10):733736
7宫智勇,牛丕业,刘琳,等. Hsp70过表达对紫外线C致DNA损伤的影响.环境与职业医学2007;24(2):186189
8张伟英,汪浩,宋蕾,等.HSP27和HSP70在老年性白内障和透明晶状体中的表达.同济大学学报(医学版) 2008;29(3):3337
9 Bagchi M, Katar M, Maisel H. Effect of exogenous stress on the tissuecultured mouse lens epithelial cells. J Cell Biochem 2002;86(2):302306
10 Bagchi M, Ireland M, Katar M, et al. Heat shock proteins of chicken lens. J Cell Biochem 2001;82(3):409414 上一页 [1] [2] |
