1  材料与方法

    1.1  材料

    1.1.1  动物  SD大鼠，SPF级，雄性，体重（250±20）g，购自北京维通利华实验动物技术有限公司，合格证编号：SCXK（京）2002-0003。

    1.1.2  药物  杞贞胶囊，由枸杞子、女贞子、墨旱莲等中草药按现代制剂制备工艺制成，北京临床药学研究所提供，批号：20050521，用蒸馏水分别配制成低剂量（16.4 g生药/100 ml）、中剂量（32.8 g生药/100 ml）和高剂量（65.6 g生药/100 ml）三个浓度的溶液，设为低、中、高剂量组；益脉康片，湖南湘雅制药有限公司提供，批号：0505102，用乳钵研碎，过200目筛，用蒸馏水配制成4.69%的溶液。

    1.1.3  主要试剂和仪器  戊巴比妥钠（购自上海化学试剂分装厂）；荧光金（购自美国荧光金公司，批号：20916）；甲醛溶液（国药集团化学试剂有限公司生产，批号：20040201）；手术显微镜（日本拓扑康公司，OMS-85型）；微型视神经夹（美国学者赠送，TKF-2型）；荧光显微镜（日本奥林巴司公司，AH-2型）；脑立体定位仪（美国David Kopf 仪器公司，900 型）；Mustek扫描仪（联想计算机公司）；CPAS图像分析软件（北京大衡软件公司）。

    1.2   方法

    1.2.1  分组  SD雄性大鼠50只，眼前部检查、Mydrine散瞳眼底检查无异常，按计算机调出的随机数字表分5组：分别为阴性对照组、阳性对照组、低剂量组、中剂量组和高剂量组，每组大鼠各10只。各组大鼠右眼为损伤眼，左眼未做视神经夹持，作为正常对照。

    1.2.2  夹伤模型及给药方法  大鼠腹腔注射2%戊巴比妥钠3 ml/kg进行麻醉，剪开外眦，在手术显微镜下剪开球结膜并做相应的分离，暴露视神经。用夹持力40 g的微型视神经夹在球后2 mm处夹持视神经60 s，恢复球结膜并缝合外眦伤口。夹持视神经时可见一过性眼底血管痉挛，夹伤后2 min内完全恢复。阴性对照组、阳性对照组、低剂量组、中剂量组和高剂量组于视神经夹伤后2 h及此后每天分别用生理盐水、4.69%益脉康和低、中、高剂量的杞贞胶囊溶液灌胃给药，4 ml/kg，实验时间为28 d。

    1.2.3  逆行标记  动物安死术前5 d，采用双上丘注射法逆行标记视网膜神经节细胞[6]。2%戊巴比妥钠3ml/kg腹腔注射使动物麻醉，将其固定在脑立体定位仪上，用牙科钻钻开颅骨，用微量注射器吸取3%荧光金，每侧上丘注射两点（前囟后5.9 mm和6.4 mm，旁开1.4 mm，深4.0 mm），每点注射1.5 ?滋l。

    1.2.4  视网膜铺片  上方12点处球结膜以缝线标记，立即取出眼球固定于10%甲醛溶液中2 h。沿角膜缘后0.5 mm剪开眼球，去除角膜和晶状体，分离视网膜并将其定向平铺[7]，放空气中自然干燥。用市售无色指甲油封片。用荧光显微镜拍摄照片，距离视乳头中心2 mm上下左右各拍摄照片一张，照片放大125倍。

    1.2.5  图像分析  使用联想Mustek扫描仪将照片以100 dpi扫入计算机，使用CPAS颗粒分析软件进行节细胞计数[8]，将上下左右4张照片节细胞数量累加，并转化成节细胞密度。右眼节细胞密度与左眼节细胞密度之比定义为节细胞存活率，即节细胞存活率= 右眼节细胞密度/左眼节细胞密度×100%。

    1.2.6  统计学方法  用SPSS 10.0软件，统计分析采用非平衡组合的多因素方差分析。

    2  结果

    实验结果显示，阴性对照组节细胞平均存活率为40.88%，阳性对照组、低剂量组、中剂量组和高剂量组节细胞的存活率分别为59.34%、52.66%和59.39%和63.00%。单因素方差分析表明，各组节细胞存活率差异有非常显著性（P<0.01）。两两比较结果显示，阴性对照组与低剂量组之间差异有显著性（P=0.014），与阳性对照组、中剂量组和高剂量组之间差异有非常显著性（P<0.01）。说明益脉康与三个剂量组的杞贞胶囊都能有效地保护视网膜神经节细胞。在用药组之中，低剂量组与高剂量组之间差异存在显著性（P=0.03），而中剂量组与高剂量用药组之间差异未见显著性（P=0.438），但其节细胞存活率仍然有所提高，从59.39%提高到63.00%，说明杞贞胶囊可以保护节细胞，而且随着剂量的增加，其保护作用逐渐增强。各组节细胞存活率见表1，阴性对照组和中剂量杞贞胶囊组视网膜节细胞荧光显微照片见图1、图2。

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