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1 资料与方法
1.1 材料 含内皮抑素基因的重组表达载体工程菌（山东大学免疫学研究所）； LMWH（50 antFXa u/mg，中国烟台东诚生化有限公司）； 健康成年新西兰白兔30只（山东大学动物实验中心），体重2.0 2.5?kg，雌雄兼有，眼部无异常。
1.2 方法
1.2.1 LMWH对ES的化学修饰 采用毕赤酵母表达系统，按照文献［4］的方法进行内皮抑素蛋白的表达，分离纯化后得到电泳单点纯的内皮抑素。采用高碘酸氧化法活化LMWH，制得LMWH活化液，于pH 9.5、0.3?mol/L的NaCO- NaHCO3缓冲液中对内皮抑素进行化学修饰。通过SDSPAGE电泳监测修饰反应过程，比较不同时间点修饰液的自由氨基修饰率、活性保留百分率。测定ES及LMWHES在25?℃和37?℃水浴中的热稳定性。
1.2.2 LMWHES及ES对兔角膜碱烧伤后新生血管抑制作用的观察 30只兔用氯胺酮（25?mg/kg）及氯丙嗪（25?mg/kg）诱导全麻，将浸润1?min的1?mol/L氢氧化钠滤纸片置于兔右眼角膜中央30?s，然后立即用20?ml BBS冲洗烧伤区及结膜囊1?min建立实验模型。
随机将兔分为3组，每组10只。碱烧伤后第一天，分别在球结膜下注射50?μg/ml LMWHES（Ⅰ组）、50?μg/ml内皮抑素（Ⅱ组）和生理盐水（对照组）各0.2?ml，以后隔日注射1次，共8次。每天行裂隙灯显微镜观察球结膜、角膜有无充血、水肿及全身状况。并于术后第4、7、10、13天用双脚规测量CNV长度，并用数码相机定位拍摄CNV生长状态，将其输入计算机使用软件Image Pro Plus进行图像分析。
碱烧伤后16天用空气栓塞法处死动物，无菌下取带2?mm宽巩膜的角膜组织进行病理学检查 ，进行HE染色和SP免疫组化分析。染色结果判断：细胞浆黄色为+，棕色为，棕黑色为；结果分析：采用日本产LUZEXF图像分析仪，以灰度值表示VEGF的含量。微血管数量观察：取上述免疫组化切片，每只眼选3张，每张切片任选5个高倍视野（×400），计算每个视野下CNV横断面数目。
1.3 统计学处理 计量资料以±s表示，采用方差分析检验，以P<0.05为差异有统计学意义。部分指标行相关分析，数据统计运算采用（statistic package social science,SPSS 11.5）统计软件包。
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