2.1.2逆转录病毒(RV) 载体 其优点是目的基因可以整合到染色体上,可以实现稳定长期表达,而且转移效率高。但目前应用于基因疗法的大部分RNA病毒载体都是源于鼠类白血病逆转录病毒。它不能转染非增殖期的细胞,所以不适用于角膜内皮及视网膜等组织的基因转染。相反，基于人类免疫缺陷病毒(human immuno-deficiency viruses，HIV)和猴免疫缺陷病毒(simian immunodeficiency viruses，SIV)的慢病毒载体(lentiviral vectors) ，编码诸如vpr之类的蛋白质，允许细胞核输入病毒基因组，而不影响相伴随的有丝分裂。慢病毒载体(lentiviral vectors) ：这种载体通常是假表型的，即为包被另外一种病毒蛋白质作准备。能够以这种方式搭载慢病毒，并具有这种特性的细胞通常是CD4+ T细胞，允许慢病毒感染多种细胞。慢病毒含有泡状口腔炎病毒(vesicular stomatitis virus，VSV-G) 的糖蛋白，已经成功地用于鼠类视网膜。在一次接种后能感染整个视网膜，并能至少稳定3mo。它需要将染色体整合，才能获得基因表达，这提示病毒载体能在RGC进行长时期传导。但是这种载体具有以下几种技术缺陷：① 任何基于人类的免疫缺陷病毒的载体系统在可以用于人类之前，都必须证明不会产生野生型人类免疫缺陷病毒。许多新近的基于病毒载体已经删除了原来的人类免疫缺陷病毒基因组的重要节段，因此，进一步减少了产生感染性病毒的危险性。②按照目前的滴度，需要30～100μL 重组病毒才能达到整个人类视网膜。最近，病毒颗粒的稳定性和浓缩技术已得到明显改善，因此，容量问题将会被解决。③需要关心的是基于人类免疫缺陷病毒载体的整合问题。整合位点似乎是随机的，因此，可能存在整合所导致的基因突变。很可能需要更精细和更大的启动子以平衡转基因和内源性基因的长期表达。染色质结构已被认为是基因表达的重要调节子，并强化了近端启动子不仅仅只是一个重要想法的思想。病毒载体整合入基因组的位点往往影响治疗性基因的表达，所以，下一代的启动子应该含有开放性染色质的调节子，诸如位点控制元素，它可以在一些情况下以暂时性的方式上调或下调治疗性基因产物水平。继续研究视网膜细胞特殊的启动子，已被认为是基因疗法的必要进展[8]。Lotery等 [9] 通过玻璃体切割和视网膜下注射将重组的猫免疫缺陷病毒(recombinant feline immuno-deficiency virus, rFIV) 载体将β半乳糖酶基因转染入cynomolgus猴视网膜。结果表明光感受器和Müller细胞有极好的转基因表达。局部炎症反应只局限在注射部位。电生理检查表明，视功能不因载体注射而受到明显影响。这提示视网膜下应用rFIV载体能转导非灵长类视网膜各种类型的视网膜细胞，rFIV载体具有潜在的治疗作用，并可用于人眼的基因疗法。Loewen等 [10]采用视网膜下注射2μL的猫免疫缺陷病毒(feline immuno-deficiency virus, FIV) 或腺病毒载体，比较两种载体行视网膜转基因的长期表达情况，在剂量-反应研究中，2×105传导单位(transducing units, TU) 中，两种载体在视网膜的传导范围一致；但在长期表达研究中，在不同的时间点(1wk；1，3，6，12和16mo)FIV载体的表达程度(grade) 均比腺病毒载体高。但大部分腺病毒注射眼均出现了局部巨噬细胞样细胞的聚集和视网膜结构的破坏。结果表明，慢病毒载体经随访16mo仍能持久表达，可用于慢性视网膜疾病的基因治疗。

    2.2 非病毒方法 包括脂质体介导法和受体介导法等。与病毒方法相比,没有致癌性,也排除了病毒感染,缺点是整合率低。近年来,人们对脂质体介导的转移方法有了较多的研究,转导效率有很大提高,如脂质体转染试剂Lipofectin 及其新一代产品Lipofectimine 。Hangai 等[11，12]用其特殊的脂质体转染系统对视网膜感光细胞层取得了较好的转染效果,但基因表达时间较用AV 载体明显短,注射后30d时基因表达已经十分微弱或消失。由于脂质体介导法还具有安全、方便的优点,所以是一种很有前途的目的基因运载体系。Hart 等[13]用受体介导法转染视网膜组织也取得了较好效果。

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