1材料和方法

    1.1材料 硅油小滴使用微孔膜乳化法制备。粘度为 5 700mPa·s硅油0.05mL在1个大气压的乳化压下通过孔径为0.45μm的纤维素微孔膜，分散于10mmol/L PBS 0.95mL液中。向1mL乳化硅油液中加入油溶性染料酞箐蓝10μg，该染料不溶于PBS，能均匀溶于硅油。充分振荡，使染料均匀着染硅油小滴。利用光学显微镜可以直接观察硅油小滴大小，并通过对拍摄照片的分析，计算出硅油小滴的直径。硅油小滴样本由制得乳化硅油液中央吸取，随机吸取3滴样本，每滴样本随机取3个视野，每个视野至少测量50个硅油小滴，用图象采集分析系统(Image－Pro Plus 6.0)测量小滴直径。重复实验3次。

    1.2方法 RPE细胞系为原代培养人RPE细胞，由第四军医大学西京医院王静波博士惠赠。细胞复苏后，Eagle培养液(delbeccos modified Eagles medium , DMEM , Gibco , USA )中加入100mL/L新生牛血清（四季青产品）、青霉素（100×103U/L）、链霉素（100×103U/L），培养箱中37℃，50mL/L CO2常规培养，次日更换培养液继续培养。选择3～6代细胞用于实验。将对数生长期的细胞按5×108个/mL密度接种于预置有盖玻片（8mm×8mm）的24孔板中，接种24h后更换培养液，每孔加入2mL培养液。实验分两组，第1组加入DMEM培养液，第2组加入加有100mL/L新生牛血清的DMEM培养液。分别向2组细胞中加入硅油含量为0（10mmol/L PBS液，空白对照），12.5,25.0,50.0mL/L的染色乳化硅油液100μL，常规培养24h，取出爬片，10mmol/L PBS液充分冲洗3次，40g/L多聚甲醛固定0.5h，用吸管吸取多聚甲醛轻轻冲洗爬片上残留硅油小滴3次，10mmol/L PBS液漂洗3次，待测。光学显微镜下观察，每张爬片随机取3个视野，每个视野至少计数50个细胞，用图象采集分析系统(Image－Pro Plus 6.0)计算细胞内吞的染色硅油小滴来分析RPE细胞对硅油小滴的吞噬作用。每个浓度设3个复孔，重复实验3次。

    统计学处理：采用数据软件SPSS11.5处理，采用t检验，进行两样本均数比较，以及LSD 检验，进行多组样本均数比较，数据表示为 。

    2结果

    用孔径为0.45μm的微孔膜制得的硅油小滴直径为4.25±0.77μm，硅油小滴可稳定至少5d。酞箐蓝可均匀着染硅油小滴，不溶于PBS，可示踪硅油小滴，分析RPE细胞内吞硅油小滴的情况。培养的RPE细胞固定于玻璃面上，在DMEM组与加有100mL/L新生牛血清的DMEM组中，空白对照中的细胞内均未见硅油小滴。与酞箐蓝标记的硅油小滴共孵育的RPE细胞对此物质有吞噬作用。RPE细胞对硅油小滴的吞噬作用呈浓度依赖性。在DMEM组中，RPE细胞内吞硅油小滴的平均数量随硅油浓度的递增而增加（各组间均为P <0.001），并没有呈现明显吞噬饱和状态。硅油浓度为50.0mL/L时，RPE细胞内吞硅油小滴数量为35.93±3.28（图1）。在加有100mL/L新生牛血清的DMEM组中，RPE细胞内吞硅油小滴的平均数量也随硅油浓度的递增而增加（各组间均为P <0.001），也没有呈现明显吞噬饱和状态。硅油浓度为50.0mL/L时，RPE细胞内吞硅油小滴数量为40.27±4.34（图1），多于同一硅油浓度的DMEM组（P <0.05）。DMEM组中各组硅油浓度的RPE细胞内吞硅油小滴数量和加有100mL/L新生牛血清的DMEM组同一浓度的RPE细胞内吞硅油小滴数量之间有明显差异（P <0.05），说明加有血清的硅油小滴使RPE细胞的吞噬能力进一步增强，血清在这一吞噬过程中起促进作用(图2A,B)。

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