1材料和方法

    1.1材料 鼠抗人MMP-2, MMP-9mAb；链霉菌抗生物素蛋白-过氧化酶免疫组化染色超敏试剂盒；胰蛋白酶试剂盒；DAB显色试剂盒；均为福建迈新生物技术开发公司产品。2002-05/2003-10住院增殖性糖尿病视网膜病变患者20例，增殖性玻璃体视网膜病变（poliferative vitreoretinopathy, PVR）患者10例，均为视网膜前表面增殖膜。正常视网膜来自2例死后12h内的角膜移植供体眼。糖尿病患者年龄45～65 (平均54.1)岁。糖尿病病史1/12～17（平均11.3）a，均为2型糖尿病。参照1984年我国眼底病学术会议指定的PDR分期标准，PDRⅤ期2例，PDR Ⅵ期18例。PVR(孔源性视网膜脱离合并PVR 6例，外伤性PVR 4例)患者年龄25～64(平均43.0)岁。病程0.5～12(平均5)mo。手术采用美国STORZ公司的玻璃体切割机，切割中后部玻璃体积血，用剥膜钩将视网膜表面增殖膜剥离，用玻璃体镊夹出。所有患者由2 名以上眼科医生诊断, 玻璃体切割手术由同一位医生施行。取出的视网膜增殖膜和正常眼球，立即用40g/L多聚甲醛固定，石蜡块包埋保存。玻片经多聚赖氨酸防脱片预处理，每个标本做4μm连续切片5张。所有切片先作HE染色，结构完整的增殖膜行免疫组织化学染色。

    1.2方法 切片经烤片、脱蜡处理，采用链霉素抗生物素蛋白-过氧化酶法（streptavidinperoxidase, SP）,按照试剂盒说明书步骤分别进行MMP-2和MMP-9的免疫组织化学染色。0.4g/L的3，3-二氨基联苯胺（3，3-diaminbezidine,DAB）显色，苏木素浅染，封片。阴性对照以PBS代替特异性第一抗体，其他步骤同前。在光镜下观察免疫组化染色切片，MMP-2和MMP-9以细胞质出现棕黄色颗粒为阳性,计算阳性率。每张切片在高倍显微镜下（400倍）随机选择5个视野，采用Metamorph/DP10/BX51图像分析软件，测量其平均灰度值。

    统计学处理：用 表示,所得数据行t 检验， P <0.05被认为差别有统计学意义。

    2结果

    2.1病理组织学观察 PDR的视网膜增殖膜中可见多量新生血管，多位于增殖膜周边部。增殖膜内还可见到较多的成纤维样细胞、数量不等的上皮样细胞及神经胶质细胞。PVR的视网膜增殖膜中可见数量不等的上皮样细胞、成纤维细胞样细胞、巨噬细胞和粒细胞，还可见胶原纤维等细胞外基质。正常视网膜细胞排列整齐，各层结构清晰完整。2.2 MMP-2和MMP-9的表达 MMP-2和MMP-9棕黄色阳性表达多数存在于细胞质中，呈散在的或聚集分布。增殖膜中的阳性细胞形态有3种：一部分呈多边形，部分细胞胞浆可见少量色素，胞核较大位于细胞中央；一部分细胞呈梭形，胞体较大，胞核为卵圆形，为成纤维样细胞：还有一部分细胞为新生血管内皮细胞(图1A，B)。PDR增殖膜细胞染色阳性率分别是70%和85%。PVR增殖膜细胞染色阳性率分别为80%和60%。正常视网膜标本MMP-2和MMP-9染色均为阴性。PDR视网膜增殖膜MMP-2和MMP-9表达的平均灰度值分别为150.64±0.63和149.69±0.78，PVR增值膜分别为150.54±0.44和151.07±0.90。PDR增殖膜与PVR增殖膜相比，MMP-2表达差别无统计学意义（P ＞0.05），MMP-9表达差别具有统计学意义（P ＜0.01），PDR增殖膜MMP-9表达高于PVR增殖膜。

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