2.2  角膜内皮形态观察  术后即刻观察照相，内皮细胞呈规则的六边形镶嵌结构，边界清晰，可见连接复合体和缝隙连接；术后1天实验组角膜内皮细胞出现六边形细胞的不规则改变和水肿，突起增多，细胞核无蓝染；对照组亦出现六边形细胞的不规则改变和水肿，突起增多，边界不清晰，可见胞核蓝染和崩解的内皮细胞。术后3天两组细胞都只见细胞六边形的轻度不规则改变和水肿。

    3  讨论

    兔角膜内皮细胞受损后不但可以通过细胞的移行、扩大和融合来修复，还可以通过细胞的有丝分裂来修复。Yano M和Tanishima T［1］研究表明，兔眼的角膜内皮细胞受损后6 h方可检测到内皮细胞的有丝分裂，24～48 h有丝分裂达到高峰；其扫描电镜研究表明，在活体或组织培养下直径4 mm的内皮损伤也可在3天之内修复。故本实验观察术后7天内角膜内皮细胞的变化可以准确反应超声乳化术对角膜内皮细胞的损伤及修复情况。内皮细胞平均面积和内皮细胞多形性程度的增加反映了内皮细胞储备功能的下降，即从创伤过程中恢复角膜生理状态的能力下降。本实验用接触型角膜内皮反射显微照相系统对角膜内皮进行照相，针对细胞平均面积、变异系数和细胞密度进行比较和分析细胞损伤和修复情况。术后1天和2天对照组2个样本出现片状黑区，考虑可能是内皮突起不平所致，也有可能是角膜混浊所致。组间比较和组内比较统计分析结果表明：实验组内皮细胞损伤修复比对照组快。内皮细胞定量分析论证了一定浓度的DECB加入BSS中能够促进超声乳化术对角膜内皮损伤的修复。锥蓝是一种生物细胞活性染料，主要对细胞核发生着色反应，对有活性的细胞核不着色，茜素红为一种神经细胞活性染色剂，依赖细胞间隙中钙的红染反应，与细胞间隙有很好的色染，能清晰地显示细胞的形态［2］。本实验中，应用锥蓝－茜素红联合染色后光镜观察显示：术后实验组角膜内皮细胞损伤较轻、修复较快。

    角膜内皮细胞对周围环境的变化极为敏感，超声乳化术中理想灌注液的应用也就显得更加重要。目前眼内灌注液种类很多，处方和质量参差不齐、特征各异，但是都以减少术中眼内环境的改变所造成的眼内组织损伤为目的，国内外尚没有出现对眼内组织损伤小且能够促进内皮细胞修复的灌注液。循环的房水为角膜内皮提供了最佳外环境，任何灌注液都难以比拟。因此理想的灌注液应具有下述特点：(1)含钾、钠、钙、氯、镁、碳酸氢根等角膜内皮生存所需的最基本离子成分；(2)含有为细胞代谢提供能量的葡萄糖；(3)有维持酸碱度稳定的缓冲系统；(4)与体液等渗；(5)含有还原型谷胱甘肽及腺苷；(6)耐高温消毒，易于配制保存。

    术中使用的BSS灌注液由日本参天制药生产，主要成分有氯化钠、氯化钾、氯化钙、氯化镁、醋酸钠、柠檬酸钠，用来调节酸碱度的氢氧化钠和盐酸等。BSS在化学成分上具备了Na+、K+、Ca2+、Cl-、Mg2+等基本离子和维持酸碱度的枸橼酸盐－醋酸盐缓冲系统。BSS与理想灌注液的差别在于：其中不含有葡萄糖、还原型谷胱甘肽和腺苷。（1）DECB是从幼牛静脉血、胎肝、胸腺中经纯化、提取、超滤等工艺制成的去蛋白小分子制剂，其主要成分为无机离子(K+、Cl-、Na+、Ca2+、Mg2+、Fe2+、Zn2+等)以及氨基酸、小分子肽(分子量小于5000D)、核苷酸、低聚糖、脂类等小分子有机物［3］。DECB中含有小分子多肽（可能包括谷胱甘肽）。细胞内一定量的谷胱甘肽可以防止细胞内ATP过度消耗，通过形成DNA的前体-脱氧核苷酸来调节蛋白质的合成、降解和发挥控酶作用，从而维持细胞内环境的稳定；而且不破坏血-房水屏障(blood-aqueous humor barier，BAB)。Araie［4］等在体外实验中观察含谷胱甘肽和不含谷胱甘肽的灌注液对角膜内皮屏障功能影响；结果显示，含有谷胱甘肽的溶液对角膜内皮屏障功能损害比不含谷胱甘肽的轻，且还原型谷胱甘肽(GSH)和氧化型谷胱甘肽(GSSG)都可维持内皮细胞正常的屏障和泵功能［5，6］。（2）DECB中含有葡萄糖和多种核苷酸直接为细胞代谢提供能量物质，并且葡萄糖能显著提高内皮细胞中谷胱甘肽的水平。（3）磷酸肌醇寡糖被认为起胰岛素受体后第二信使的作用，可促进葡萄糖的摄取和利用。本实验研究结果表明：超声乳化术中以含一定浓度DECB的BSS作为术中冲洗剂和术后留置剂能促进角膜内皮细胞损伤的修复可能与上述原因有关。

【参考文献】
  1 Yano M，Tanishima T.Wound healing in rabbit corneal endothelium.Jpn Opthalmol，1980，24：297-309.

2 赵江月，曲勃，陈琳琳，等.不同染色剂对兔眼角膜内皮细胞影响的研究.眼科新进展，2005，25（4）：335-337.

3 于鸿儒，肖建英，刘用璋，等.小牛血去蛋白提取物的生化性质及药效学的实验研究.药物生物技术，1998，5(1)：34-37.

4 Araie M.Barrier function of corneal endothelium and the intraocular irrigating solutions.Arch Ophthalmol，1986，104(3)：435－438.

5 Whikehart DR，Edelhan ser HF.GIutathione in rabbit corneal endothelia：the efects of selected perfusion fluids.Invest Ophthal Visual Sci，1978，17：455-464.

6 Riley M.Pump and leak in regulation of fluid transport in rabbit cornea.Curt Eye Res，1985，4：371-380.

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