2   结果

    2.1   视网膜神经节细胞的鉴定结果   Nissel小体染色检查：免疫组化染色结果显示细胞胞浆内有蓝色颗粒，证实细胞类型为神经元细胞。因此，依据细胞的组织来源、细胞的形态以及免疫组化染色结果可判断此种细胞为视网膜神经节细胞。

    2.2   视网膜神经节细胞的存活状况   相差显微镜下观察，细胞于培养3 h开始贴壁，贴壁后的细胞呈圆形，胞体中部较暗，光晕明显。24 h细胞伸出粗细长短不等的突起。细胞呈多边形，大多数细胞质折光强，细胞分布稀疏分散，无聚集生长的现象；高压的神经节细胞核膜收缩成新月体状，核体积减小，细胞体积缩小，表面起泡，成不规则形状。

    2.3   DSX对高压培养视网膜神经节细胞凋亡的影响   见表1。模型组的细胞凋亡百分率高于空白对照组的细胞凋亡百分率，差异有非常显著性（P<0.01）。DSX组凋亡百分率低于模型组、高于空白对照组，差异均有非常显著性（P<0.01）。表1   DSX对高压培养视网膜神经节细胞凋亡的影响注：与空白对照组比较，★★P<0.01；与模型组比较，▲▲P<0.01

    2.4   DSX对高压培养视网膜神经节细胞凋亡基因表达的影响   见表2。与空白组比较，模型组有2个与细胞凋亡相关的基因S100B、NGFR表达上调，与模型组比较，实验组的S100B表达恢复正常，NGFR表达下调。表2   DSX对高压培养视网膜神经节细胞凋亡基因的影响

    3   讨论

    S100B蛋白是一种钙传感器蛋白，在细胞增殖、分化、能量代谢、传导细胞内信号及细胞凋亡中发挥重要的作用［3，4］，编码S100B蛋白的基因位于人类染色体21q22.2～q22.3，含有3个外显子和2个内含子，其mRNA由1095bp组成，编码91个氨基酸的S100B蛋白。体外实验证明S100B蛋白多通过与钙结合发挥其生理作用［5］。高浓度的S100B蛋白有神经毒性，细胞培养研究表明，S100B蛋白参与NO介导、细胞因子依赖的神经元致死途径。S100B浓度过高则导致神经元凋亡［6］。

    NGFR作为一种经典的神经营养因子在轴突的生长和细胞的存活方面起着非常重要的作用，并能促进损伤后神经元再生。神经系统损伤后，NGF效应神经元表达NGFR增加，而且靶区NGF的水平也明显升高。实验证明P75NTR可选择性地导致细胞程序性死亡，在神经系统中扮演凋亡使者的角色，而此作用能够由于其结合了NGF而被抑制［7］。NGF与P75NTR结合后能促使细胞内的NFκB的激活，可能对细胞凋亡起拮抗作用。

    药理研究证明灯盏花具有舒张脑血管、抗脑缺血、改善微循环、降低全血黏度和血浆纤维蛋白原等作用［8］。目前已广泛用于脑梗死［9］、糖尿病周围神经病变［10］等方面。眼科用于包括视网膜静脉阻塞、缺血性视神经病变、视网膜动脉阻塞外伤性视神经病变在内的眼底病［11］等疾病。对大鼠实验性高眼压的也研究表明灯盏细辛注射液具有改善大鼠实验性高眼压后视神经轴浆运输的作用［12］。本实验利用体外高压培养的视网膜神经节细胞，探讨DSX的细胞保护作用，发现DSX的作用途径可能是抑制S100B蛋白的表达增加，具有类似神经营养因子的作用，使神经营养因子受体NGFR表达下调，从而起到抑制RGCs凋亡，保护RGCs的作用。

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