3.3 含量测定 高效液相色谱法[2]。
3.3.1 色谱条件 色谱柱C18,4.6 mm×250 mm粒度μm流动相乙腈―pH 7.0磷酸盐缓冲液―水(45∶220∶1735)流速1.5 ml/min,检测波长254 nm,进标量10 ml。
3.3.2 标准曲线制备 取头孢他啶对照品约15 mg,精密称定,置于100 ml量瓶中,加磷酸盐缓冲液(pH 7.0)15 ml溶解,用水稀释至刻度,摇匀。精密量取对照品溶液5 μl、10 μl、15 μl、20 μl、25 μl分别注入色谱仪中(每份进样2次),记录色谱图,以峰面积对头孢他啶对照品溶液的进样量X(μg)做线性回归,得到线性方程为:A=86973.9X-85252.9,r=0.9993。
3.3.3 样品测定 取头孢他啶眼膏约3.0 g,精密称定,置分液漏斗中,加40 ml氯仿水浴加热使基质溶解,用热磷酸缓冲液20 ml、10 ml、10 ml提取,合并提取液,置200 ml量瓶中,加水至刻度,摇匀,用0.45 μm微孔滤膜滤过(相当于15 mg/100 mm他啶)。精密吸取滤液10 ml进行测定(进样2次取平均值)代入方程。
3.4 回收率实验 精密称取头孢他啶适量(3份),按上述配方制备头孢他啶眼膏样品3批(含量分别为配方中头孢他啶含量的80%、100%、120%),按供试品溶液制备项下操作,制备各样品溶液,按液相色谱法测定(每批样品测定2次),测得各样品含量。计算平均回收率为98.1%,RSD为0.43%,结果见表1。
3.5 稳定性实验 取在常温下保存0个月、1个月、3个月、6个月的样品,分别按供试品溶液制备项下操作,制备各样品溶液,分别精密吸取样品溶液10 μl进样,在上述色谱条件下进行测定,结果RSD=2.56%。表1 回收率实验结果
4 临床应用
4.1 病例选择 全部病例为门诊患者,其中泪囊炎12例,角膜炎21例,急性结膜炎28例,角膜溃疡7例,共68例。
4.2 用药方法 将眼膏挤出0.1 cm×1 cm大小挤入结膜囊内,每日3~4次。用药后稍事休息即可。
4.3 疗效判定标准 参照《中国新药临床指导原则》[3],按下列标准进行判断。痊愈:症状、体征完全消失;有效:症状、体征基本消失,但有时出现不适;无效:症状、体征无明显改变。
4.4 结果 连续用药5天判定疗效,痊愈58例,有效8例,无效2例,总有效率为97%,未发现任何不适。
5 讨论
(1)头孢他啶的3-内酰胺环遇水易水解失效。而选用凡士林制成眼膏剂保证主药稳定。(2)眼膏剂与滴眼剂比较,具有在局部保留时间长、药效持久等特点。(3)含量测定,采用高效液相色谱法,具有快速、灵敏、准确等特点,已经实验证明。其操作亦比较简便、结果可靠、回收率比较高。(4)眼膏配制过程应在无菌柜内进行。
[参考文献]
1 张仁斌.高效液相色谱法在医药研究中心应用.上海:上海科学技术出版社,1983,18-28,145-151.
2 胡昌勤.抗生素质控分析中HPLC分析的基本理论.北京:北京气象出版社,2001,27.
3 国家药典委员会.中华人民共和国药典(二部).北京:化学工业出版社,2005,134-135.
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