眼球的制片过去多都采用火棉胶包埋为佳，但其制作过程繁多，时间长、切片厚，不能做细菌或其他特殊染色。若以普通石蜡包埋切片，则眼球经二甲苯及浸蜡等处理收缩过甚而使视网膜有折卷脱位现象，切片亦破碎不整，各层之联系紊乱（见图1），有碍病理诊断，达不到病理检验需要，因此我科采用眼球一旁开窗固定特殊易行方法而得到满意切片效果。
1 材料与方法
1.1 材料收集 1998～2004年在我院行眼球切除患者标本6例，年龄45～68岁，病程数十天至6个月，单眼发病。无诱因视力下降、疼痛、无光感、眼睑水肿，结膜高度充血、水肿，角膜透明，晶状体、玻璃体眼底窥不清。6例另一侧眼玻璃体、晶状体、瞳孔、虹膜、前房、角膜、眼压均正常，眼睑启闭好，视力1.0～1.5，体格检查：神志清，查体合作，皮肤巩膜无黄染，浅表淋巴结未扪及肿大，实验室检查结果在正常范围内。
1.2 方法 （1）在眼球一旁开一小窗，以Bouin液固定2～4天［1］（Bouin液即苦味酸饱和水溶液75ml，40%甲醛水溶液25ml，冰醋酸5ml），渗透力强，对组织固定均匀，收缩很少，使细胞内的物质尽量接近其生活状态时的形态结构和位置［1］，染色效果好， 是主要制片环节。（2）50%酒精24h；切开眼球继续脱水，更换脱水剂时，避免直接冲击眼球，最好先将眼球取出待溶液倾入瓶内，再轻轻将眼球放还瓶内。（3）60%～95%各级酒精脱水各12h。（4）纯酒精12h更换1次继续脱水，其作用是脱去组织中的水分。（5）香柏油透明4～6h；香柏油是酒精脱水后良好的透明剂，对组织收缩硬化程度小。（6）二甲苯透明2h；对组织收缩性强。时间不宜过长，但可与香柏油交替使用，效果为佳。（7）二甲苯及56℃的软蜡等量混合浸30min［1］。（8）浸56℃石蜡2h，再浸58℃～60℃ 1h，使石蜡渗入组织块中变硬，常规切片及苏木素——伊红染色，可得到满意完整的切片（见图2、图3）。
图1 原制片结果：各层结构破碎不整，大量异形色素细胞（略）
图2 现制片结果：瘤细胞梭形、排列束状（略）
图3 大量色素细胞着色效果清晰（略）
图4 色素细胞侵犯视神经（略）
2 结果
2.1 病理检查 （1）大体检查：灰褐色，眼球为2.5cm×2.5cm×2cm大小，表面光滑，切面黑色似囊性，内容物为暗黑色状物填充，视神经0.5cm×0.4cm×0.4cm，其中2例眼球切面可见境界清楚、暗红色结节1.5cm×0.8cm×0.5cm。（2）组织学特点：4例细胞呈长梭形，核卵圆形，核仁不明显，偶见核分裂相，部分区域围绕血管排列束状。1例可见细胞体积大，圆形或多边形，细胞界限清楚，胞核大，核分裂易见。另1例以大量异形色素细胞伴明显坏死为主要特征，眼球各层结构不清，视神经周围组织可见异形色素细胞浸润（见图4）。免疫组化：HMB-45阳性，S-100阳性。
2.2 病理诊断 眼球恶性黑色素瘤。
3 讨论
眼球恶性黑色素瘤是临床上少见的肿瘤，多发生于30岁以上的成人，特别是50～60岁的老人，男性略为多见［2］。结合眼球壁的各层结构，该肿瘤由血管膜层的色素细胞发生。即色素层的黑色素细胞以及视网膜色素上皮细胞，细胞体积较大，在其树枝状细胞质突起中充满细小的类圆形色素颗粒［2］，色素层黑色素瘤早期临床上引起视力障碍及视网膜剥脱，晚期能蔓延、转移并危及生命。根据细胞组织学形态又分为4型：（1）梭形细胞型：肿瘤细胞常呈束状、栅栏状或旋涡状排列，颇似神经鞘瘤或平滑肌瘤，此型色素细胞含量较少。（2）上皮样细胞型：瘤细胞大小不一，细胞呈圆形或多角形，细胞质丰富，呈颗粒状，核分裂相多见。（3）混合型：由梭形细胞和上皮样细胞混合组成。（4）坏死型：以肿瘤坏死为主要特征，组织广泛坏死溶解，导致囊肿形成。色素层黑色素细胞含量多寡与预后无关，但常复发青光眼，反复出现玻璃体出血和眼内炎症等毒性刺激症状。黑色素瘤常沿血道转移，以肝脏常见，脑及其他器官亦可发生［2］，无论肿瘤组织中黑色素细胞的含量多少，免疫组化HMB-45几乎为阳性，此外S-100蛋白和NSE染色部分阳性，同时收集我院1998～2004年发生于眼球恶性黑色素瘤，其技术制片非常重要，在固定眼球时是整个制片的重中之重的环节，固定整个眼球在眼球旁开一小窗［1］，使固定液完全进入眼内，固定液以Bouin液为佳，该固定液对组织穿透力较强，收缩性较小，组织细胞结构完整，细胞着色鲜明，脱水从低浓度至高浓度的方法，避免组织过度收缩，使我科在制作眼球切片中得到满意结果。眼球结构各层次清楚，细胞着色清晰艳丽，因此比过去制作切片得到更大的收获，适用于眼球制片的特殊处理，具有临床推广应用价值。
（本文图片见封三）（略）
【参考文献】
1 王伯沄,李玉松,黄高升,等.北京:人民卫生出版社,2000,65,67,936,946.
2 中山医科大学病理教研室，同济医科大学病理教研室.外科病理学,第2版.武汉:湖北科学技术出版社,1999,1487. |
