3  讨论

     近视眼发病机制的研究是目前眼科领域的研究热点之一，目前已公认近视眼的发生是在视网膜调控下巩膜主动重塑的结果[8-9]。目前，研究较多的参与近视眼调控的视网膜因子有RA、DA、血管活性肠肽、bFGF、TGF-β2等[9]。Müller细胞及其突起广泛分布于视网膜各类神经元胞体及神经纤维之间，与神经元相互作用，在视网膜的功能活动中发挥重要作用。Müller细胞感受视网膜神经元信号，调节神经元活性，与其能合成、分泌多种神经活性物质及表达多种信号因子的受体有关。体外研究表明，视网膜Müller细胞能合成DA、RA、bFGF、TGF-β2和表达bFGF的受体FGFR-1、DA受体、RA受体[1-4]。但Müller细胞是否能通过调控这些视网膜因子的表达，参与近视眼发生尚有待证实。因此，探索豚鼠近视眼视网膜Müller细胞的培养条件具有重要意义。

    目前，视网膜Müller细胞的培养方法主要有组织块法和酶消化法两种。我们采用酶消化法成功地培养出豚鼠近视眼视网膜Müller细胞，并用GFAP、Vimentin免疫组化染色加以证实。本研究中，近视眼豚鼠的平均年龄是5～6周龄，其视网膜Müller细胞生长速度较慢，第1代细胞需30～35 d才能基本融合，传代细胞融合也需15～20 d。与近视眼豚鼠相比，成年人、大鼠和小鼠视网膜Müller细胞的培养周期相对较短，第1代细胞一般需2～4周就能融合[10-11]。另外，豚鼠近视眼视网膜Müller细胞衰老较快，第3代细胞生长速度明显减慢。因此，进行GFAP、Vimentin免疫组化染色时，我们选用第2代细胞。鉴于豚鼠近视眼视网膜Müller细胞的生长特点，要想快速获得大量目的细胞用于科学研究有一定难度，因此，有必要继续改进其培养方法，譬如加入饲养细胞[12]、使用条件化培养基[11]等，进一步加快Müller细胞的培养速度，这都有待进一步研究证实。

    视网膜细胞成分比较复杂，包含三级神经元、神经胶质细胞、视网膜色素上皮细胞、血管内皮细胞、周细胞等，因此，Müller细胞的原代培养离不开细胞的纯化。豚鼠视网膜无血管，避免了血管内皮细胞和周细胞的混入，取材时仔细分离神经视网膜并反复清洗，尽可能减少掺入视网膜色素上皮细胞。视网膜神经元无分裂增殖能力，且不能贴壁生长，只能附着于Müller细胞表面，换液、传代后即可消失。通过GFAP、Vimentin免疫组化染色可知，我们获得的豚鼠近视眼视网膜Müller细胞的纯度在90％以上。

    综上所述，我们采用酶消化法成功培养出豚鼠近视眼Müller细胞，有助于为以后研究视网膜Müller细胞与近视眼的关系提供目的细胞。

【参考文献】
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