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5羟色胺在豚鼠离焦性近视眼中含量的变化

http://www.cnophol.com 2008-12-4 15:08:30 中华眼科在线

   【摘要】  目的:探讨5羟色胺(5hydroxytryptamine,5HT)在豚鼠近视离焦模型形成中的作用。方法:将24只4周龄的豚鼠分成2组,离焦组(18只36眼),包括离焦实验眼(右眼,戴接触镜)和离焦对照眼(左眼,未戴接触镜);空白对照组(6只12眼)除检查外不做任何干预。将PMMA接触镜配戴在离焦组豚鼠右眼前,自然光下饲养14d后除去镜片,建立近视离焦模型。近视离焦模型建立后,分别处死实验组及空白对照组豚鼠,取出眼球,分离出视网膜、脉络膜及巩膜组织。用高效液像色谱电化学检测法测定视网膜、脉络膜及巩膜组织中5HT含量。结果:在豚鼠视网膜、脉络膜、巩膜内均有5HT存在,其中脉络膜中含量最高,其次为巩膜及视网膜;离焦实验眼视网膜、脉络膜及巩膜中5HT含量明显升高(P<0.01);与离焦对照眼及空白对照组相比较差异显著(P<0.05)。结论:5HT可能参与了离焦性近视的形成。

   【关键词】  离焦性近视 5羟色胺 豚鼠 效液像色谱 电化学检测法

  0引言

    近视眼是人类常见眼病之一,在普通人群中患病率很高,全世界平均患病率为25%~40%;我国是近视眼的高发地区,根据1998年在北京顺义地区以人群为基础的调查,15岁男、女学生近视眼的患病率分别达37.6%和55%[1]。长期以来,随着人类文明的发展,近视眼的发病率不断上升,一些严重的并发症可以导致失明,在世界各地近视致盲率占第4~6位,因此防治近视已成为世界性共同关心的问题。虽然对近视防治的研究已有200a历史,提出过多种假说,但是近视眼的发病机制尚不明确,因此探讨近视眼发病机制,从病因上治疗近视眼是眼科工作者要解决的关键问题。5羟色胺(5hydroxytryptamine, 5HT)是一种神经递质,存在于中枢及周围神经系统,眼内5HT对眼有很大的影响,它提高眼内压,收缩眼内血管,促进有丝分裂,改变视网膜无长突细胞生理过程。有研究发现鸡形觉剥夺近视眼模型5HT的代谢产物含量明显减少,推测5HT可能作为一种神经递质参与了形觉剥夺近视的形成,但具体作用机制尚不清楚[2]。本研究试图通过检测豚鼠实验性近视离焦组与对照组视网膜、脉络膜及巩膜内5HT含量是否有差异来探讨5HT在离焦性近视形成中的表达。

  1材料和方法

  1.1材料

  德国Moller2102手术显微镜、美国Waters公司液相色谱仪,510高压泵、U6K进样器、 Wchers464电化学检测器、玻璃碳电极、Millennium色谱工作站、5羟色胺(Aldrich)、3,4二羟卞胺 (Sigma)、超声波细胞破碎机(德国drhhielscher UP2000H)高速离心机(美国 Lkb公司)。将24只4wk龄的豚鼠随机分成2组,离焦组(18只36眼),包括离焦实验眼(右眼,戴接触镜)和离焦对照眼(左眼,未戴接触镜);空白对照组(6只12眼)除检查外不做任何干预。

  1.2方法

  1.2.1动物模型制作

  PMMA接触镜的配带:将PMMA接触镜(镜片直径13.5mm,光学区直径10.5mm,基弧9.6mm,屈光度10.00D)配戴在健康4wk龄的三色豚鼠(由中国医科大学实验动物中心提供)右眼前,作为离焦实验眼。饲养温度维持在20~25℃,光照与黑暗周期比为12h∶12h,专用豚鼠饲料,专人饲养。白天隔2h观察豚鼠一次,若镜片脏,用棉签清理干净;若镜片脱落则及时固定。14d后除去镜片。本实验符合 Helsinki 宣言的要求,并得到中国医科大学伦理委员会的批准和实验动物中心的认可。表1  两组视网膜、脉络膜及巩膜内5HT含量比较(略)

  1.2.2实验标本的制备

  动物模型制作好后分别处死实验组及空白对照组豚鼠,立即取出眼球,无菌操作,手术显微镜下锯齿缘处切开眼球,将前段眼组织和玻璃体除去,虹膜恢复器快速分离出视网膜、脉络膜及巩膜组织,快速置于灭菌的Eppendorf管中,标号后快速放入液态氮中保存,冷冻后移入70℃冰箱中储存待用。

  1.2.3高效液像色谱测定视网膜、脉络膜及巩膜内5HT含量

  将离焦组18只豚鼠(包括离焦实验眼18眼和离焦对照眼18眼)及空白对照组6只豚鼠(12眼)的视网膜、脉络膜及巩膜利用高效液像色谱测定其中5HT含量。色谱条件:BDS C18色谱柱(大连依利特色谱公司)250mm×4.6mm,电极电压0.7V,缓冲液:3mmol/L庚烷磺酸钠,100mmol/L醋酸钠,85mmol/L柠檬酸,0.2mmol/L EDTA,调PH=3.7,流动相∶缓冲液甲醇(体积比92∶8),流速:1.0mL/min。溶液配制:(1)标准溶液配制,将上述标准品用0.1mol/L高氯酸,配成质量浓度为1g/L的储备液,分析时用流动相稀释成1ng/L混合液;(2)内标溶液配制按配制标准溶液的方法,配制内标物质3,4二羟卞胺(DHBA)溶液,使其质浓度为4mg/L;(3)样本提取溶液配制,0.1mol/L高氯酸,内含5μL内标溶液。用精密电子称先称Eppendorf管重量,取离焦组18只豚鼠(实验眼18眼,对照眼18眼)及空白对照组6只豚鼠(12眼)的冰冻视网膜、脉络膜及巩膜组织标本,每个标本作为一个样品,置入上述已称重的Eppendorf管内,再称出管加样品的重量,减去样品重量,即得到样品的湿重。样品称重后加入95μL 0.1mol/L高氯酸及5μL的内标溶液,在冰浴上超声匀浆,于2000r/min离心15min,取上清20μL进样分析。取水溶液,分别加入5羟色胺(5HT)2,5,40,400μg/L,按样品处理方法操作后,以5HT浓度为横坐标,以反应峰高值为纵坐标,绘制标准曲线,计算回归方程及相关系数。计算方法:根据标准品的色谱分析,参照标准品的峰高大小及所测样品的峰高大小进行比较,确定其含量。

    统计学处理:采用均数差异t检验的方法对空白对照组与离焦实验组及离焦对照组之间5HT含量结果进行差异的显著性分析。采用SPSS11.4软件。

  2结果

    标准曲线结果表明,5HT浓度在5~100μg/L范围内有良好线性关系:r=0.9991(图1)。豚鼠正常眼中,视网膜、脉络膜、巩膜内均有5HT存在,其中脉络膜中含量最高,其次为巩膜及视网膜。离焦眼中,视网膜、脉络膜及巩膜内5HT含量均明显增加(P<0.01);实验组对照眼与空白对照组相比较无明显差异(P>0.05,表1)。

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(来源:互联网)(责编:duzhanhui)

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