胡维琨 张  虹 李贵刚 谢二娟
    华中科技大学同济医学院附属同济医院眼科，武汉 430030
 
    目的：研究内皮素-1（endothelin-1, ET-1）对体外培养牛角膜内皮细胞（bovine corneal endothelium cells, BCECs）增殖的影响并探讨氯离子通道-3（chloride channel 3，CLC-3）在其中的作用。

    方法：采用免疫组化染色法检测增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen, PCNA) 的表达，MTT法检测细胞增殖，同时应用流式细胞仪检测细胞周期变化。应用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）、免疫印迹（Western blot）方法检测CLC-3 mRNA和蛋白的表达。免疫荧光测定CLC-3蛋白的表达部位。采用反义核酸技术，观察CLC-3基因在ET-1对体外培养牛角膜内皮细胞影响中的作用。

    结果：体外培养BCECs在转录和翻译水平均有内源性CLC-3基因表达，表达产物定位于细胞膜和部分细胞浆。ET-1剂量依赖性的增加培养的BCECs CLC-3 mRNA和蛋白的表达，促进其增殖（MTT OD值和PCNA表达阳性细胞平均吸光度值A增加），10 pmol/L时起作用，200 pmol/L时发挥最大作用。CLC-3反义寡核苷酸（antisense oligodeoxynucleotide，AS-ODN）可以剂量相关性的下调CLC-3 mRNA及蛋白的表达，浓度依赖性抑制200 pmol/L ET-1促进细胞增殖的作用，并使细胞周期停滞于G1期。

    结论：ET-1通过开放氯通道，增加CLC-3 mRNA和蛋白的表达，促进培养的BCECs增殖。CLC-3 AS-ODN阻断CLC-3氯通道，抑制ET-1促进细胞增殖的作用，使细胞周期停滞于G1期。

    关键词：内皮素-1；氯离子通道-3；反义寡核苷酸；氯离子通道；细胞周期；牛；内皮细胞，角膜

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