朱婧1 魏锐利1 王梁华2 焦炳华2
1上海第二军医大学附属长征医院眼科 上海 200003
2第二军医大学生物化学与分子生物学教研室
目的 探讨Bcl10基因在中国人群眼附属器黏膜相关淋巴组织MALT淋巴瘤、不典型淋巴组织增生和淋巴组织反应性增生中的表达和存在的新的突变，分析其突变，确定新的突变类型在临床诊断和发病机制中的作用。
方法 收集临床手术切除的新鲜冰冻组织标本共55例，经病理诊断为眼附属器MALT淋巴瘤23例，不典型淋巴组织增生标本10例，淋巴组织反应性增生10例, 同时以正常外周淋巴结组织12例做为阴性对照组。用酸性酚氯仿法从新鲜冰冻肿瘤组织中提取总RNA；逆转录合成cDNA，行聚合酶链反应PCR和巢式PCR检测眼附属器MALT淋巴瘤和淋巴组织反应性增生及正常外周淋巴结组织中Bcl10基因的表达，连接PMD18-T载体转化BL21大肠杆菌株，用双脱氧Sanger法行DNA测序，通过Blast比对分析，把发现的突变碱基对照国外报道的突变序列。同时光镜下HE染色，用石蜡包埋的标本通过免疫组织化学法和免疫荧光染色，在激光共聚焦显微镜下检测Bcl10和NF-κB的共定位情况。所有参与研究的患者均通过眼科检查，接受手术并明确病理分型。
结果 在23例MALT淋巴瘤组中，有15例检出Bcl10基因cDNA表达，对照国外报道的突变序列，发现有新的突变11例。10例不典型淋巴组织增生中发现有突变1例，与国外报道的相同。10例淋巴组织反应性增生中发现有新的突变1例。12例正常外周淋巴结组织均未检出Bcl10基因的表达。Bcl10蛋白在20例MALT淋巴瘤石蜡标本中表达(86.96 %)，其中中等强度核表达13例，弱到中等强度胞浆表达7例。5例不典型增生标本中胞浆弥漫表达，1 例反应性增生标本中胞核胞浆表达。NF-kappaB 的反应因子Iκα 在18例MALT淋巴瘤中胞核胞浆有弥漫性表达，其中Bcl10和Iκα共表达有13例。有Bcl10表达的标本一定有Iκα的表达，但有Iκα的表达却不一定有Bcl10的表达。
结论 Bcl10基因在中国人群眼附属器MALT淋巴瘤中有新的突变形式，其中以第213位氨基酸甘氨酸突变为谷氨酸在该研究人群中为主要新的突变形式；其次为截断型突变即由Bcl10的CARD结构域至C端截断，是为全长233位氨基酸截断为99位氨基酸。该突变序列我们已发布于GENBANK (EF189176), 突变型Bcl10基因见于核表达和NF-kappaB共定位，与Bcl10核转位激活NF-kappaB转录入核引起凋亡的改变是一致的。在不典型淋巴组织增生和淋巴组织反应性增生中发现了新的突变证明Bcl10基因突变的检测灵敏于病理诊断，能在尚没有形态学改变及其他可鉴别指标下，判断出病变阶段和性质的改变。能对患者提供准确和及时的早期诊断，避免误诊和漏诊，为取得满意的疗效提供机会。由此可见Bcl10基因的突变与肿瘤的恶性程度有关，并可能在激活NF-kappaB信号转导通路抑制淋巴瘤细胞凋亡的致瘤机制中有重要作用，可作为判断预后的灵敏指标。
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