【摘要】 目的 观察神经细胞黏附分子(NCAM)在大鼠不同发育时期视神经及坐骨神经上的表达，探讨NCAM在视神经与坐骨神经分布的差异。方法 50只SD大鼠，按出生后天数分成5组，取部分视神经和坐骨神经，免疫组织化学方法和计算机图像分析技术，测定大鼠视神经和坐骨神经NCAM表达。结果 NCAM在不同年龄大鼠视神经和坐骨神经均见表达。坐骨神经表达水平高于视神经。出生后7天组明显高于其他年龄组。结论 大鼠视神经和坐骨神经NCAM表达差异有显著性。
【关键词】 神经细胞黏附分子；视神经；坐骨神经；免疫组织化学；大鼠
Expression of NCAM in the optic nerve and sciatic nerve of rats
SUN Jian-hua,ZHU Yi-hua,ZHU Jie,et al.
Ophthalmology Department,Loudi City Centre Hospital,Loudi 417000,China
【Abstract】 Objective To investigate the expression of NCAM in the optic nerve and sciatic nerve of the rats during the different developing stages.Methods 50 SD rats were randomly divided into five groups.Both optic nerve and sciatic nerve were taken from them and determined the expression of NCAM by immunohistochemistry.The immunohistochemistry stainings were analyzed by automatic image analysis technology.Results The expression of NCAM in the sciatic nerve was higher than that in the optic nerve.The expression in the rats of 7days age was significantly higher than that in other groups.Conclusion The expression of NCAM in the optic nerve was significantly different from that of the sciatic nerve in the rats.
【Key words】 neuronal cell adhesion molecule;optic nerve;sciatic nerve;immunohistochemistry;rat
神经细胞黏附分子(neuronal cell adhesion molecule,NCAM),是细胞黏附分子的重要成分，具有高度黏附性。它介导神经元之间识别和黏附，在神经系统生长发育和神经再生中发挥着重要作用。本文采用免疫组织化学的方法，研究大鼠不同发育时期NCAM在视神经、坐骨神经内的分布及其变化，从而探讨视神经和坐骨神经的NCAM环境的异同及其与再生能力的关系。
1 材料与方法
1.1 动物材料 健康雄性Sprague-Dauley大鼠50只(福建医科大学实验动物中心提供)，按出生后7、15、30、45、60天分5组，每组10只。
1.2 标本的取材、固定和制作 大鼠用氯胺酮(10mg/kg)腹腔麻醉，眼科手术显微镜下，沿角巩缘全周剪开球结膜，各肌间钝性分离至球后，暴露视神经，取出眼球壁后视神经长约5mm。于股后部做正中切口，暴露梨状肌下缘至胫腓分叉处的坐骨神经段，切取坐骨神经长5mm。标本经中性福尔马林固定，常规脱水，石蜡包埋，作4μm厚石蜡切片。
1.3 HE染色 石蜡切片烤片过夜，常规脱蜡，苏木精染色，盐酸酒精分色，伊红染色，常规脱水后中性树胶封固。
1.4 免疫组织化学SP法 视神经、坐骨神经石蜡切片，使用SP-超敏试剂盒(福建迈新公司)染色。第一抗体NCAM Ab-1(1∶100)为美国NEOMARKERS公司产品。AEC显色，苏木精对比染色，水性封片。切片在同一条件下进行。以PBS代替一抗作为阴性对照。以大脑阳性片作阳性对照。
1.5 图像分析 光镜下，依着色强度分为强阳性、阳性、弱阳性、极弱阳性和阴性。标本经Video Pro32彩色图像分析系统(澳大利亚Leading Edge Pty Ltd)处理，每组取10张不同样本切片，置于光镜(×40)下，每张切片取3个视野，通过彩色图像分析系统，分别测量平均光密度值(OD)。
1.6 统计学方法 对所得的数据进行统计处理，用均数±标准差(±s)表示。比较NCAM在大鼠坐骨神经及视神经表达的平均光密度值，采用独立样本比较t检验，不同发育时期OD值比较采用方差分析、Post Hoc t检验，P<0.05为差异有显著性。
2 结果
2.1 HE染色
2.1.1 视神经(纵切片) 有髓神经纤维，纵行走向，纤维细小、结构致密，无清晰的基膜。神经胶质细胞沿纤维走向呈散在的列队状排列。出生后随着年龄增加，胶质细胞数量减少，排列疏散零乱。
2.1.2 坐骨神经(纵切片) 有髓神经纤维，纵行走向，纤维较粗大、结构较疏松，可见清晰的基膜。雪旺细胞与神经内膜紧密相连，顺纤维走向散在分布。出生后随着年龄增加，胶质细胞数量减少，纤维变粗大、相对疏松。
2.2 NCAM免疫组织化学染色
2.2.1 NCAM在坐骨神经中的表达 NCAM抗体的阳性反应产物呈红色，在不同发育时期坐骨神经膜上，呈不规则的线状分布。随着年龄增加，反应强度逐渐减弱。其中7天组对抗体着色最深，反应为强阳性、深红色(见图1)。60天组对抗体着色较浅，反应产物表现为弱阳性、浅红色(见图2)。
2.2.2 NCAM在视神经中的表达 NCAM抗体的阳性反应产物呈红色，分散在视神经胶质细胞表面。在大鼠出生后60天内，随着年龄增加，对NCAM抗体的反应强度逐渐减弱。在5个年龄组，7天组对抗体的反应略强、着色较深(见图3)，60天组表达最弱(见图4)。
2.3 计算机图像分析 NCAM在大鼠坐骨神经和视神经表达的OD值，见表1。坐骨神经表达水平明显高于视神经。
表1 NCAM在大鼠不同发育时期坐骨神经及视神经表达OD值 略
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